《微生物學(xué)及檢驗(yàn)》重要考點(diǎn)（二）

1.常用的堿性染料有堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、亞甲藍(lán)等。

2.常用的酸性染料有伊紅、剛果紅等。

3.電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負(fù)電荷的被染物結(jié)合。由于細(xì)菌的等電點(diǎn)在pH2～5之間，在堿性、中性、弱酸性的環(huán)境中細(xì)菌均帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的染料結(jié)合而著色。

4.培養(yǎng)基種類：

（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有基礎(chǔ)生長所需的基本營養(yǎng)成分，最常用的是肉浸液，俗稱肉湯，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。基礎(chǔ)培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的增菌、檢驗(yàn)，也是制備其他培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。

（2）營養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中可加入葡萄糖、血液、生長因子等特殊成分，供營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌和需要特殊生長因子的細(xì)菌生長。最常用的是血瓊脂平板、巧克力血平板等。

（3）鑒別培養(yǎng)基：利用細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，觀察細(xì)菌生長過程中分解底物所釋放的不同產(chǎn)物，通過指示劑的反應(yīng)不同來鑒別細(xì)菌。例如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂和動力-吲哚-尿素（MIU）培養(yǎng)基等。

（4）選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入抑制劑，去抑制標(biāo)本中的雜菌生長，有助于所選擇的細(xì)菌種類的生長。例如培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌，因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。

（5）特殊培養(yǎng)基：包括厭氧培養(yǎng)基和細(xì)菌L型培養(yǎng)基等。前者是培養(yǎng)專性厭氧菌的培養(yǎng)基，除含營養(yǎng)成分外，還加入還原劑以降低培養(yǎng)基的氧化還原電勢，如皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸鈉培養(yǎng)基等。后者是針對細(xì)胞壁缺損的細(xì)菌L型，由于胞內(nèi)滲透壓較高，故培養(yǎng)基必須采用高滲低瓊脂培養(yǎng)基。

5.細(xì)菌的接種與分離技術(shù)：

（1）常用的平板劃線分離法有以下兩種：①連續(xù)劃線分離法：此法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。②分區(qū)劃線分離法：本法適用于雜菌量較多的標(biāo)本。

（2）斜面接種法：該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。

（3）液體接種法：多用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種。

（4）穿刺接種法：此法主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖管的接種。

（5）傾注平板法：測定牛乳、飲水和尿液等標(biāo)本細(xì)菌數(shù)時常用此方法。

（6）涂布接種法：常用于紙片法藥物敏感性測定，也可用于被檢標(biāo)本中的細(xì)菌計(jì)數(shù)。

6.血瓊脂平板上的溶血分類：

（1）α溶血：菌落周圍血培養(yǎng)基變?yōu)榫G色環(huán)狀；紅細(xì)胞外形完整無缺。

（2）β溶血：紅細(xì)胞的溶解在菌落周圍形成一個完全清晰透明的環(huán)。

（3）γ溶血：菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化；紅細(xì)胞沒有溶解或無缺損。

（4）雙環(huán)：在菌落周圍完全溶解的暈圈外有一個部分溶血的第二圓圈。

7.細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)章節(jié)內(nèi)容均需要掌握。

8.自動血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)的基本原理是檢測細(xì)菌和真菌生長時所釋放的二氧化碳（CO2）來作為血液中有無微生物存在的指標(biāo)。

9.葡萄球菌：

（1）本屬菌革蘭染色陽性，形似葡萄串狀。觸酶試驗(yàn)陽性。

（2）抵抗力：對理化因素抵抗力強(qiáng)，耐熱，耐干燥，耐高鹽，是抵抗力最強(qiáng)的無芽胞細(xì)菌。

（3）致病性：①食物中毒，急性胃腸炎；②燙傷樣皮膚綜合征；③中毒性休克綜合征；④葡萄球菌性腸炎。

（4）金黃色葡萄球菌：觸酶試驗(yàn)陽性、血漿凝固酶試驗(yàn)陽性、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)陽性、對新生霉素敏感。

表皮葡萄球菌：觸酶試驗(yàn)陽性、血漿凝固酶試驗(yàn)陰性、對新生霉素敏感。

腐生葡萄球菌：觸酶試驗(yàn)陽性、血漿凝固酶試驗(yàn)陰性、對新生霉素耐藥。

10.鏈球菌屬：

（1）A群鏈球菌對桿菌肽敏感；B群鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽性，可水解馬尿酸鈉；七葉苷試驗(yàn)陽性用于鑒定D群鏈球菌；α-溶血性鏈球菌對optochin耐藥，不被膽汁溶解，不分解菊糖，可與肺炎鏈球菌相鑒別。

（2）根據(jù)鏈球菌在血平板上溶血情況分為三類：

1）甲型（α）溶血性鏈球菌：菌落呈灰色針尖狀，菌落周圍有1～2mm寬的草綠色溶血環(huán)，故又稱草綠色鏈球菌。本菌為條件致病菌。

2）乙型（β）溶血性鏈球菌：通稱溶血性鏈球菌，菌落較小，灰白色，菌落周圍有2～4mm寬的透明溶血環(huán)。該型細(xì)菌致病性最強(qiáng)，常引起人和動物多種疾病。

3）丙型（γ）鏈球菌：呈灰白色細(xì)小菌落，在菌落周圍無溶血環(huán)。一般無致病性。

（3）猩紅熱多由A群鏈球菌感染所致。草綠色鏈球菌常與亞急性心內(nèi)膜炎相關(guān)。

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