陽性雜交瘤細(xì)胞怎么樣進(jìn)行克隆化培養(yǎng)與凍存?
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單個細(xì)胞培養(yǎng)又稱克隆化。細(xì)胞克隆化一般至少進(jìn)行3~5次。克隆化有以下幾種方法:
(一)熒光激活細(xì)胞分選儀 先進(jìn)、高效、高純度、昂貴。
(二)有限稀釋法 操作簡單,出現(xiàn)率高,為實驗室最常用的方法。
(三)顯微操作法 直觀可靠,但操作時間過長,容易增加污染機會。
(四)軟瓊脂平板法 本法缺點是瓊脂融化溫度較難掌握,過高會導(dǎo)致細(xì)胞死亡,過低使細(xì)胞分布不均勻,操作較復(fù)雜,克隆出現(xiàn)率不穩(wěn)定。
雜交瘤細(xì)胞應(yīng)及時凍存,以保證細(xì)胞不會因污染或過多傳代變異丟失染色體而喪失功能。目前均采用液氮保存細(xì)胞。(注意逐步降溫、快速復(fù)溫)
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