免疫印跡法是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項(xiàng)檢測蛋白質(zhì)的技術(shù)，它將SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的高分辨力與抗原抗體反應(yīng)的高特異性相結(jié)合。

第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）。抗原等蛋白樣品經(jīng)SDS處理后帶負(fù)電荷，在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動(dòng)，分子量越小，泳動(dòng)速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見（只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶）。

第二階段為電轉(zhuǎn)移。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。

第三階段為酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜（相當(dāng)于包被了抗原的固相載體）依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物，使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3，3-二氨基聯(lián)苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈藍(lán)紫色）。陽性反應(yīng)的條帶清晰可辨。并可根據(jù)SDS-PAGE時(shí)加入的分子量標(biāo)準(zhǔn)，確定各組分的分子量。