單向擴散試驗是什么呢
單向擴散試驗是什么呢?快來跟著小編了解一下吧!
在瓊脂內(nèi)混入抗體,待測抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴散,如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合,則形成沉淀環(huán)。
(一)試管法 將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中,注入小試管內(nèi),上層加抗原溶液,使其自由擴散,在抗原抗體比例恰當位置形成沉淀環(huán)。
(二)平板法 是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖凝膠內(nèi),制成平板,在上打孔,將抗原加入孔中,37℃行自由擴散,24~48小時后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán),測定環(huán)的直徑或面積計算標本中待測抗原的濃度。有兩種計算方法:
1.Mancini曲線 適用大分子抗原和長時間擴散(>48小時)的結(jié)果,沉淀環(huán)直徑的平方(d2)與抗原濃度(c)呈線性關(guān)系:c/d2=k。
2.Fahey曲線 適用于小分子抗原和較短時間擴散的結(jié)果處理,用半對數(shù)紙畫線,濃度對數(shù)logc與擴散環(huán)直徑(d)呈線性關(guān)系:logc/d=k(其中c為抗原濃度,d為沉淀環(huán)直徑,k為常數(shù))。
(三)影響因素
1.抗血清必須特異性強、效價高、親和力強,在良好條件下保存。
2.每次測定都必須作標準曲線。
3.每次測定時必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。
4.注意雙環(huán)現(xiàn)象(出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分)。
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