細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查法是公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試中需要了解的內(nèi)容,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編整理了相關(guān)知識(shí)點(diǎn),以便大家方便復(fù)習(xí)。
一、顯微鏡放大法
細(xì)菌形體微小,肉眼不能直接看到,必須藉助顯微鏡放大后才能看到。
普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡(lightmicroscope)以可見光(日光或燈光)為光源,波長0.4~0.7μm,平均約0.5μm.其分辨率為光波波長的一半,即0.25μm.0.25μm的微粒經(jīng)油鏡放大1000倍后成0.25mm,人的眼睛便能看清。一般細(xì)菌都大于0.25μm,故可用普通光學(xué)顯微鏡予以觀察。
電子顯微鏡電子顯微鏡(electronmicroscope)是利用電子流代替可見光波,以電磁圈代替放大透鏡。電子波長極短,約為0.005nm,其放大倍數(shù)可達(dá)數(shù)十萬倍,能分辨1nm的微粒。不僅能看清細(xì)菌的外形,內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)也可一覽無遺。電子顯微鏡顯示的形象,可投射到熒光屏上,也可照像拍攝。當(dāng)前使用的電子顯微鏡有兩類,即透射電子顯微鏡(transmissionelectronmicroscope,TEM)和掃描電子顯微鏡(scanningelectronmicroscope,SEM)。SEM的分辨率一般較TEM低,但可清楚地顯露觀察物體的三維立體圖像醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)整理。配合電子顯微鏡觀察使用的標(biāo)本制備方法有用磷鎢酸或鉬酸銨作負(fù)染色、投影法(shadowing)、超薄切片(ultrathinsection)、冰凍蝕刻法(freezeetching)等。電子顯微鏡標(biāo)本須在真空干燥的狀態(tài)下檢查,故不能觀察活的微生物。
此外,尚有暗視野顯微鏡(darkfieldmicroscope)、相差顯微鏡(phasecontrastmicroscope)、熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)和同焦點(diǎn)顯微鏡(cofocalmicroscope)等,適用于觀察不同情況下的細(xì)菌形態(tài)和(或)結(jié)構(gòu)。
二、染色法
細(xì)菌體小半透明,經(jīng)染色后才能觀察較清楚。染色法是染色劑與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)的結(jié)合。最常用的染色劑是鹽類。其中,堿性染色劑(basicstain)由有色的陽離子和無色的陰離子組成,酸性染色劑(acidicstain)則相反。菌細(xì)胞富含核酸醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)整理,可以與帶正電荷的堿性染色劑結(jié)合;酸性染色劑不能使細(xì)菌著色,而使背景著色形成反差,故稱為負(fù)染(negativestaining)。
染色法有多種,最常用最重要的分類鑒別染色法是革蘭染色法(Gramstain)。該法是丹麥細(xì)菌學(xué)家革蘭(HansChristianGram)于1884年創(chuàng)建,至今仍在廣泛應(yīng)用。標(biāo)本固定后,先用堿性染料結(jié)晶紫初染,再加碘液媒染,使之生成結(jié)晶紫—碘復(fù)合物;此時(shí)不同細(xì)菌均被染成深紫色。然后用95%乙醇處理,有些細(xì)菌被脫色,有些不能。最后用稀釋復(fù)紅或沙黃復(fù)染。此法可將細(xì)菌分為兩大類:不被乙醇脫色仍保留紫色者為革蘭陽性菌,被乙醇脫色后復(fù)染成紅色者為革蘭陰性菌。革蘭染色法在鑒別細(xì)菌、選擇抗菌藥物、研究細(xì)菌致病性等方面都具有極其重要的意義。
革蘭染色法的原理尚未完全闡明。但與菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)密切相關(guān),如果在結(jié)晶紫—碘染之后醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)整理,乙醇脫色之前去除革蘭陽性菌的細(xì)胞壁,革蘭陽性菌細(xì)胞就能夠被脫色。目前,對革蘭陽性和革蘭陰性菌細(xì)胞壁的化學(xué)組分已十分清楚,但對革蘭陽性菌細(xì)胞壁阻止染料被溶出的原因尚不清楚。
細(xì)菌染色法中尚有單染色法、抗酸染色法、以及莢膜、芽胞、鞭毛、細(xì)胞壁、核質(zhì)等特殊染色法。