先將含有遺傳物質(zhì)的供體細胞的核移植到去除了細胞核的卵細胞中,利用微電流刺激等使兩者融合為一體,然后促使這一新細胞分裂繁殖發(fā)育成胚胎,當(dāng)胚胎發(fā)育到一定程度后,再被植入動物子宮中使動物懷孕,便可產(chǎn)下與提供細胞核者基因相同的動物。這一過程中如果對供體細胞進行基因改造,那么無性繁殖的動物后代基因就會發(fā)生相同的變化。
克隆技術(shù)不需要雌雄交配,不需要精子和卵子的結(jié)合,只需從動物身上提取一個單細胞,用人工的方法將其培養(yǎng)成胚胎,再將胚胎植入雌性動物體內(nèi),就可孕育出新的個體。這種以單細胞培養(yǎng)出來的克隆動物,具有與單細胞供體完全相同的特征,是單細胞供體的“復(fù)制品”。英國英格蘭科學(xué)家和美國俄勒岡科學(xué)家先后培養(yǎng)出了“克隆羊”多利和“克隆猴”??寺〖夹g(shù)的成功,被人們稱為“歷史性的事件,科學(xué)的創(chuàng)舉”。有人甚至認(rèn)為,克隆技術(shù)可以同當(dāng)年原子彈的問世相提并論。
克隆技術(shù)可以用來生產(chǎn)“克隆人”,可以用來“復(fù)制”人,因而引起了全世界的廣泛關(guān)注。對人類來說,克隆技術(shù)是悲是喜,是禍?zhǔn)歉??唯物辯證法認(rèn)為,世界上的任何事物都是矛盾的統(tǒng)一體,都是一分為二的。克隆技術(shù)也是這樣。如果克隆技術(shù)被用于“復(fù)制”像希特勒之類的戰(zhàn)爭狂人,那會給人類社會帶來什么呢?即使是用于“復(fù)制”普通的人,也會帶來一系列的倫理道德問題。如果把克隆技術(shù)應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn),將會使優(yōu)良牲畜品種的培育與繁殖發(fā)生根本性的變革。若將克隆技術(shù)用于基因治療的研究,就極有可能攻克那些危及人類生命健康的癌癥、艾滋病等頑疾??寺〖夹g(shù)猶如原子能技術(shù),是一把雙刃劍,劍柄掌握在人類手中。人類應(yīng)該采取聯(lián)合行動,避免“克隆人”的出現(xiàn),使克隆技術(shù)造福于人類社會。
年代 | 1952 | 1972 | 1978 | 1996 | 1998 | 2000 | 2001 |
成果 | 克隆蝌蚪 | 基因復(fù)制 | 試管嬰兒 | 克隆羊 | 大批克隆 | 克隆猴 | 克隆人 |
在自然界,有不少植物生來就具有克隆本能,如番薯、馬鈴薯、玫瑰等能夠進行插枝繁殖的植物。而動物的克隆技術(shù),則經(jīng)歷了由胚胎細胞到體細胞的發(fā)展過程。
一些無脊椎動物(蟲類、某些魚類、蜥蜴和青蛙)未受精的卵也可以在某些特定環(huán)境下,比如受到化學(xué)刺激的條件下,成長并發(fā)育成完整個體。這一過程也被稱為是產(chǎn)卵雌性的克隆。
早在20世紀(jì)50年代,美國的科學(xué)家以兩棲動物和魚類作為研究對象,首創(chuàng)了細胞核移植技術(shù),這可以比做“貍貓換太子”。其基本過程是先將含有遺傳物質(zhì)的供體細胞的核移植到去除了細胞核的卵細胞中,利用微電流刺激等手段使兩者融合為一體,然后促使這一新細胞分裂繁殖發(fā)育成胚胎,當(dāng)胚胎發(fā)育到一定程度后(羅斯林研究所克隆羊用了約為6天的時間),再被植入動物子宮中使動物懷孕便可產(chǎn)下與提供細胞者基因相同的動物。在這一過程中如果對供體細胞進行基因改造,那么無性繁殖的動物后代基因就會發(fā)生相同的變化。培育成功三代克隆鼠的“火奴魯魯技術(shù)”與克隆多利羊技術(shù)的主要區(qū)別在于,克隆過程中的遺傳物質(zhì)不經(jīng)過培養(yǎng)液的培養(yǎng),而是直接用物理方法注入卵細胞里面。這一過程中采用化學(xué)刺激法代替電刺激法來促使卵細胞的融合。1986年,英國科學(xué)家魏拉德森用胚胎細胞克隆出一只羊,以后又有人相繼克隆出牛、鼠、兔、猴等動物。這些克隆動物的誕生,均是利用胚胎細胞作為供體細胞進行細胞核移植從而獲得成功的。這種克隆技術(shù)的難度要小一些,比較適合研究。
而克隆綿羊“多利”是用乳腺上皮細胞(體細胞)作為供體細胞進行細胞核移植的,它翻開了生物克隆史上嶄新的一頁,突破了利用胚胎細胞進行核移植的傳統(tǒng)方式,使克隆技術(shù)有了長足的進展。多利完全繼承了其親生母親一體細胞提供者一多塞特母綿羊的全部DNA的基因特征,是多塞特母綿羊百分之百的“復(fù)制品”。
同一克隆的所有成員的遺傳構(gòu)成是完全相同的,例外僅見于有突變發(fā)生時。自然界早已存在天然植物、動物和微生物的克隆,例如:同卵雙胞胎實際上就是一種克隆。然而,天然的哺乳動物克隆的發(fā)生率極低,成員數(shù)目太少(一般為兩個),且缺乏目的性,所以很少能夠被用來為人類造福,因此,人們開始探索用人工的方法來生產(chǎn)高等動物克隆。這樣,克隆一詞就開始被用作動詞,指人工培育克隆動物這一動作。
目前,生產(chǎn)哺乳動物克隆的方法主要有胚胎分割和細胞核移植兩種。克隆羊“多利”,以及其后各國科學(xué)家培育的各種克隆動物,采用的都是細胞核移植技術(shù)。所謂細胞核移植,是指將不同發(fā)育時期的胚胎或成體動物的細胞核,經(jīng)顯微手術(shù)和細胞融合方法移植到去核卵母細胞中,重新組成胚胎并使之發(fā)育成熟的過程。與胚胎分割技術(shù)不同,細胞核移植技術(shù),特別是細胞核連續(xù)移植技術(shù)可以產(chǎn)生無限個遺傳相同的個體。由于細胞核移植是產(chǎn)生克隆動物的有效方法,故人們往往把它稱為動物克隆技術(shù)。
采用細胞核移植技術(shù)克隆動物的設(shè)想,最初由漢斯·施佩曼在1938年提出,他稱之為“奇異的實驗”,即從發(fā)育到后期的胚胎(成熟或未成熟的胚胎均可)中取出細胞核,將其移植到一個卵子中。這一設(shè)想是現(xiàn)在克隆動物的基本途徑。
從1952年起,科學(xué)家們首先采用青蛙開展細胞核移植克隆實驗,先后獲得了蝌蚪和成體蛙。1963年,中國童第周教授領(lǐng)導(dǎo)的科研組,首先以金魚等為材料,研究了魚類胚胎細胞核移植技術(shù),獲得成功。 1964年,英國科學(xué)家格登(J.Gurdon)將非洲爪蟾未受精的卵用紫外線照射,破壞其細胞核,然后從蝌蚪的體細胞——個上皮細胞中吸取細胞核,并將該核注入核被破壞的卵中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)有1.5%這種移核卵分化發(fā)育成為正常的成蛙。格登的試驗第一次證明了動物的體細胞核具有全面性。哺乳動物胚胎細胞核移植研究的最初成果在1981年取得——卡爾·伊爾門澤和彼得·霍佩用鼠胚胎細胞培育出發(fā)育正常的小鼠。1984年,施特恩·維拉德森用取自羊的未成熟胚胎細胞克隆出一只活產(chǎn)羊,其他人后來利用牛、豬、山羊、兔和獼猴等各種動物對他采用的實驗方法進行了重復(fù)實驗。1989年,維拉德森獲得連續(xù)移核二代的克隆牛。1994年,尼爾·菲爾斯特用發(fā)育到至少有120個細胞的晚期胚胎克隆牛。到1995年,在主要的哺乳動物中,胚胎細胞核移植都獲得成功,包括冷凍和體外生產(chǎn)的胚胎;對胚胎干細胞或成體干細胞的核移植實驗,也都做了嘗試。但到1995年為止,成體動物已分化細胞核移植一直未能取得成功。
克隆羊“多利”的意義和引起的反響
以上事實說明,在1997年2月英國羅斯林研究所維爾穆特博士科研組公布體細胞克隆羊“多利”培育成功之前,胚胎細胞核移植技術(shù)已經(jīng)有了很大的發(fā)展。實際上,“多利”的克隆在核移植技術(shù)上沿襲了胚胎細胞核移植的全部過程,但這并不能減低“多利”的重大意義,因為它是世界上第一例經(jīng)體細胞核移植出生的動物,是克隆技術(shù)領(lǐng)域研究的巨大突破。這一巨大進展意味著:在理論上證明了,同植物細胞一樣,分化了的動物細胞核也具有全能性,在分化過程中細胞核中的遺傳物質(zhì)沒有不可逆變化;在實踐上證明了,利用體細胞進行動物克隆的技術(shù)是可行的,將有無數(shù)相同的細胞可用來作為供體進行核移植,并且在與卵細胞相融合前可對這些供體細胞進行一系列復(fù)雜的遺傳操作,從而為大規(guī)模復(fù)制動物優(yōu)良品種和生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物提供了有效方法。
在理論上,利用同樣方法,人可以復(fù)制“克隆人”,這意味著以往科幻小說中的獨裁狂人克隆自己的想法是完全可以實現(xiàn)的。因此,“多莉”的誕生在世界各國科學(xué)界、政界乃至宗教界都引起了強烈反響,并引發(fā)了一場由克隆人所衍生的道德問題的討論。各國政府有關(guān)人士、民間紛紛作出反應(yīng):克隆人類有悖于倫理道德。盡管如此,克隆技術(shù)的巨大理論意義和實用價值促使科學(xué)家們加快了研究的步伐,從而使動物克隆技術(shù)的研究與開發(fā)進入一個高潮。
克隆羊“多莉”的誕生在全世界掀起了克隆研究熱潮,隨后,有關(guān)克隆動物的報道接連不斷。1997年3月,即公布“多莉”培育成功后近1個月的時間里,美國、中國臺灣和澳大利亞科學(xué)家分別發(fā)表了他們成功克隆猴子、豬和牛的消息。不過,他們都是采用胚胎細胞進行克隆,其意義不能與“多莉”相比。同年7月,羅斯林研究所和PPL公司宣布用基因改造過的胎兒成纖維細胞克隆出世界上第一頭帶有人類基因的轉(zhuǎn)基因綿羊“波莉”(Polly)。這一成果顯示了克隆技術(shù)在培育轉(zhuǎn)基因動物方面的巨大應(yīng)用價值。
1998年7月,美國夏威夷大學(xué)Wakayama等報道,由小鼠卵丘細胞克隆了27只成活小鼠,其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代,這是繼“多利”以后的第二批哺乳動物體細胞核移植后代。此外,Wakayama等人采用了與“多利”不同的、新的、相 對簡單的且成功率較高的克隆技術(shù),這一技術(shù)以該大學(xué)所在地而命名為“檀香山技術(shù)”。
此后,美國、法國、荷蘭和韓國等國科學(xué)家也相繼報道了體細胞克隆牛成功的消息;日本科學(xué)家的研究熱情尤為驚人,1998年7月至1999年4月,東京農(nóng)業(yè)大學(xué)、近畿大學(xué)、家畜改良事業(yè)團、地方(石川縣、大分縣和鹿兒島縣等)家畜試驗場以及民間企業(yè)(如日本最大的奶商品公司雪印乳業(yè)等)紛紛報道了,他們采用牛耳部、臀部肌肉、卵丘細胞以及初乳中提取的乳腺細胞克隆牛的成果。至1999年底,全世界已有6種類型細胞——胎兒成纖維細胞、乳腺細胞、卵丘細胞、輸卵管/子宮上皮細胞、肌肉細胞和耳部皮膚細胞的體細胞克隆后代成功誕生。
2000年6月,中國西北農(nóng)林科技大學(xué)利用成年山羊體細胞克隆出兩只“克隆羊”,但其中一只因呼吸系統(tǒng)發(fā)育不良而早夭。據(jù)介紹,所采用的克隆技術(shù)為該研究組自己研究所得,與克隆“多利”的技術(shù)完全不同,這表明中國科學(xué)家也掌握了體細胞克隆的尖端技術(shù)。
2012年3月18日凌晨,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所胚胎工程與繁殖技術(shù)室在昌平試驗牛場通過剖腹產(chǎn),獲得體細胞克隆公牛1頭,母牛妊娠期279天,牛犢出生重58.2千克,目前生理指標(biāo)一切正常。經(jīng)北京華大方瑞鑒定中心鑒定,該克隆后代與細胞來源的供體公牛DNA一致。這是我國首次采用無透明帶克隆方法獲得的荷斯坦種公牛體細胞克隆后代,也是第三例荷斯坦種公牛體細胞克隆公牛。
在不同種間進行細胞核移植實驗也取得了一些可喜成果,1998年1月,美國威斯康星一麥迪遜大學(xué)的科學(xué)家們以牛的卵子為受體,成功克隆出豬、牛、羊、鼠和獼猴五種哺乳動物的胚胎,這一研究結(jié)果表明,某個物種的未受精卵可以同取自多種動物的成熟細胞核相結(jié)合。雖然這些胚胎都流產(chǎn)了,但它對異種克隆的可能性作了有益的嘗試。1999年,美國科學(xué)家用牛卵子克隆出珍稀動物盤羊的胚胎;中國科學(xué)家也用兔卵子克隆了大熊貓的早期胚胎,這些成果說明克隆技術(shù)有可能成為保護和拯救瀕危動物的一條新途徑。
奇妙的克隆技術(shù)已展示出廣闊的應(yīng)用前景,概括起來大致有以下四個方面:
(1)培育優(yōu)良畜種和生產(chǎn)實驗動物;
(2)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物;
(3)生產(chǎn)人胚胎干細胞用于細胞和組織替代療法;
(4)復(fù)制瀕危的動物物種,保存和傳播動物物種資源。
以下就生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物和胚胎干細胞作簡要說明。
轉(zhuǎn)基因動物研究是動物生物工程領(lǐng)域中最誘人和最有發(fā)展前景的課題之一,轉(zhuǎn)基因動物可作為醫(yī)用器官移植的供體、作為生物反應(yīng)器,以及用于家畜遺傳改良、創(chuàng)建疾病實驗?zāi)P偷?。但目前轉(zhuǎn)基因動物的實際應(yīng)用并不多,除單一基因修飾的轉(zhuǎn)基因小鼠醫(yī)學(xué)模型較早得到應(yīng)用外,轉(zhuǎn)基因動物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物蛋白的研究時間較長,已進行了10多年,但目前在全世界范圍內(nèi)僅有2例藥品進入3期臨床試驗,5~6個藥品進入2期臨床試驗;而其農(nóng)藝性狀發(fā)生改良、可資畜牧生產(chǎn)應(yīng)用的轉(zhuǎn)基因家畜品系至今沒有誕生。轉(zhuǎn)基因動物制作效率低、定點整合困難所導(dǎo)致的成本過高和調(diào)控失靈,以及轉(zhuǎn)基因動物有 性繁殖后代遺傳性狀出現(xiàn)分離、難以保持始祖的優(yōu)良勝狀,是制約當(dāng)今轉(zhuǎn)基因動物實用化進程的主要原因。
體細胞克隆的成功為轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)掀起一場新的革命,動物體細胞克隆技術(shù)為迅速放大轉(zhuǎn)基因動物所產(chǎn)生的種質(zhì)創(chuàng)新效果提供了技術(shù)可能。采用簡便的體細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)實施目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)移,可以避免家畜生殖細胞來源困難和低效率。同時,采用轉(zhuǎn)基因體細胞系,可以在實驗室條件下進行轉(zhuǎn)基因整合預(yù)檢和性別預(yù)選。在核移植前,先把目的外源基因和標(biāo)記基因(如LagZ基因和新霉素抗生基因)的融合基因?qū)肱囵B(yǎng)的體細胞中,再通過標(biāo)記基因的表現(xiàn)來篩選轉(zhuǎn)基因陽性細胞及其克隆,然后把此陽性細胞的核移植到去核卵母細胞中,最后生產(chǎn)出的動物在理論上應(yīng)是100%的陽性轉(zhuǎn)基因動物。采用此法,Schnieke等(Bio Report,1997)已成功獲得6只轉(zhuǎn)基因綿羊,其中3只帶有人凝血因子IX基因和標(biāo)記基因(新霉素抗性基因),3只帶有標(biāo)記基因,目的外源基因整合率高達50%。Cibelli(Science,1997)同樣利用核移植法獲得3頭轉(zhuǎn)基因牛,證實了該法的有效性。由此可以看出,當(dāng)今動物克隆技術(shù)最重要的應(yīng)用方向之一,就是高附加值轉(zhuǎn)基因克隆動物的研究開發(fā)。
胚胎干細胞(ES)是具有形成所有成年細胞類型潛力的全能干細胞。科學(xué)家們一直試圖誘導(dǎo)各種干細胞定向分化為特定的組織類型,來替代那些受損的體內(nèi)組織,比如把產(chǎn)生胰島素的細胞植入糖尿病患者體內(nèi)??茖W(xué)家們已經(jīng)能夠使豬ES細胞轉(zhuǎn)變?yōu)樘鴦拥男募〖毎?,使人ES細胞生成神經(jīng)細胞和間充質(zhì)細胞和使小鼠ES細胞分化為內(nèi)胚層細胞。這些結(jié)果為細胞和組織替代療法開辟了道路。目前,科學(xué)家已成功分離到人ES細胞(Thomson等1998,Science),而體細胞克隆技術(shù)為生產(chǎn)患者自身的ES細胞提供了可能。把患者體細胞移植到去核卵母細胞中形成重組胚,把重組胚體外培養(yǎng)到囊胚,然后從囊胚內(nèi)分離出ES細胞,獲得的ES細胞使之定向分化為所需的特定細胞類型(如神經(jīng)細胞,肌肉細胞和血細胞),用于替代療法。這種核移植法的最終目的是用于干細胞治療,而非得到克隆個體,科學(xué)家們稱之為“治療克隆”。
克隆技術(shù)在基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用也是很有意義的,它為研究配子和胚胎發(fā)生,細胞和組織分化,基因表達調(diào)控,核質(zhì)互作等機理提供了工具。
作為一個新興的研究隊 在實踐中,克隆動物的成功率還很低,維爾穆特研究組在培育“多利“的實驗中,融合了277枚移植核的卵細胞,僅獲得了“多莉”這一只成活羔羊,成功率只有0.36%,同時進行的胎兒成纖維細胞和胚胎細胞的克隆實驗的成功率也分別只有1.7%和1.1%,即使是使用“檀香山”技術(shù),以分化程度較低的卵丘細胞為核供體,其成功率也只有百分之幾。
此外,生出的部分個體表現(xiàn)出生理或免疫缺限。以克隆牛為例,日本、法國等國培育的許多克隆牛在降生后兩個月內(nèi)死去;到2000年2月,日本全國已共有121頭體細胞克隆牛誕生,但存活的只有64頭。觀察結(jié)果表明,部分犢牛胎盤功能不完善,其血液中含氧量及生長因子的濃度都低于正常水平;有些牛犢的胸腺、脾和淋巴腺未得到正常發(fā)育;克隆動物胎兒普遍存在比一般動物發(fā)育快的傾向,這些都可能是死亡的原因。
即使是正常發(fā)育的“多利”,也被發(fā)現(xiàn)有早衰跡象。染色體的末端被稱為端粒,它決定著細胞能夠分裂的次數(shù):每一次分裂端粒都會縮短,而當(dāng)端粒耗盡后細胞就失去了分裂能力。1998年,科學(xué)家發(fā)現(xiàn)“多利”的細胞端粒比正常的要短,即其細胞處于更衰老的狀態(tài)。當(dāng)時認(rèn)為,這可能是用成年綿羊的細胞克隆“多利”造成的,使其細胞具有成年細胞的印記,但這一解釋目前受到了挑戰(zhàn),美國馬薩諸塞州的醫(yī)生羅伯特·蘭扎等用培養(yǎng)的衰老細胞克隆牛,得到6頭小牛,出生5~10個月后發(fā)現(xiàn)這些克隆牛的端粒比普通同齡小牛要長,有的甚至比普通新生小牛的端粒還長?,F(xiàn)在還不清楚這一現(xiàn)象的原因,也不清楚為何與“多利“的情況有巨大差別。但這一實驗說明,在一些情況下克隆過程能改變成熟細胞的分子鐘,使其“恢復(fù)青春”,關(guān)于這種變化對克隆動物壽命的影響,還有待于進一步觀察。
除了以上的理論和技術(shù)障礙外,克隆技術(shù)(尤其是在人胚胎方面的應(yīng)用)對倫理道德的沖擊和公眾對此的強烈反應(yīng)也限制了克隆技術(shù)的應(yīng)用。但幾年來克隆技術(shù)的發(fā)展表明,世界各科技大國都不甘落后,誰也沒有放棄克隆技術(shù)研究。這一點上英國政府的態(tài)度非常具有代表性,在1997年2月底宣布中止對“多莉”研究小組投資后不到1個月,英國科技委員會就對克隆技術(shù)發(fā)表專題報告,表明英國政府將重新考慮這一決定,認(rèn)為盲目禁止這方面的研究并不是明智之舉,關(guān)鍵在于建立一定的規(guī)范利用它為人類造福。
一個細菌經(jīng)過20分鐘左右就可一分為二;一根葡萄枝切成十段就可能變成十株葡萄;仙人掌切成幾塊,每塊落地就生根;一株草莓依靠它沿地“爬走”的匍匐莖,一年內(nèi)就能長出數(shù)百株草莓苗……凡此種種,都是生物靠自身的一分為二或自身的一小部分的擴大來繁衍后代,這就是無性繁殖,無性繁殖的英文名稱叫“Clone”,譯音為“克隆”。
自然界的許多動物,在正常情況下都是依靠父方產(chǎn)生的雄性細胞(精子)與母方產(chǎn)生的雌性細胞(卵子)融合(受精)成受精卵(合子),再由受精卵經(jīng)過一系列細胞分裂長成胚胎,最終形成新的個體,這種依靠父母雙方提供性細胞、并經(jīng)兩性細胞融合產(chǎn)生后代的繁殖方法就叫有性繁殖,但是,如果我們用外科手術(shù)將一個胚胎分割成兩塊,四塊、八塊……最后通過特殊的方法使一個胚胎長成兩個、四個,八個……生物體,這些生物體就是克隆個體,而這兩個、四個、八個……個體就叫做無性繁殖系(也叫克隆)。
1979年春,中國科學(xué)院武漢水生生物研究所的科學(xué)家用鯽魚囊胚期的細胞進行人工培養(yǎng),經(jīng)過385天59代連續(xù)傳代培養(yǎng)后,用直徑10微米左右的玻璃管在顯微鏡下從培養(yǎng)細胞中吸出細胞核,在此同時,除去鯽魚卵細胞的核,讓卵細胞留出空間作好接納囊胚細胞核的準(zhǔn)備,一切準(zhǔn)備就緒后,把玻璃管吸出的核移放到空出位置的鯽魚卵細胞內(nèi),得到了囊胚細胞核的卵細胞在人工培養(yǎng)下大部分夭亡了,在189個這種換核卵細胞中,只有兩個孵化出了魚苗,而最終只有一條幼魚渡過難關(guān),經(jīng)過80多天培養(yǎng)后長成8厘米長的鯽魚。這種鯽魚并沒有經(jīng)過雌、雄細胞的結(jié)合,僅僅是給卵細胞換了個囊胚細胞的核,實際上是由換核卵產(chǎn)生的,因此也是克隆魚。
在克隆鯽魚出現(xiàn)之前,英國牛津大學(xué)的科學(xué)家已經(jīng)在1960年和1962年,先后用非洲一種有爪的蟾蜍(非洲爪蟾)進行過克隆試驗。試驗方式是先用紫外線照射爪蟾卵細胞,破壞其中的核,然后依靠高超的外科手術(shù)從爪蟾蝌蚪的腸上皮細胞、肝細胞、腎細胞中取出核,并把這些細胞的核精確地放進已被紫外線破壞了細胞核的卵細胞內(nèi),經(jīng)過精心照料,這些換核卵中終于有一部分長出了活蹦亂跳的爪蟾,這種爪蟾也不是經(jīng)過精細胞和卵細胞州結(jié)合產(chǎn)生的,所以也是克隆爪蟾。
中國著名生物學(xué)家童第周先生在1978年成功地進行了黑斑蛙的克隆試驗,他將黑斑蛙的紅細胞的核移人事先除去了核的黑斑蛙卵中,這種換核卵最后長成能在水中自由游泳的蝌蚪。
魚類換核技術(shù)的成熟和兩棲類換核的成功,使一批從事良種培育工作的科學(xué)家激動不已,既然鯽魚的囊胚細胞核取代鯽魚卵細胞核后能得到克隆魚,那么異種魚換核能否得到新的雜種魚呢?中國科學(xué)家首先提出了這個問題,也首先解決了這個問題,就是培養(yǎng)克隆鯽魚成功的那個研究所,設(shè)法把鯉魚胚胎細胞的核取代了鯽魚卵細胞的核。鯉魚細胞核和鯽魚卵細胞質(zhì)居然能相安無事,并開始了類似受精卵分裂發(fā)育的過程,最后長出有“胡須”的“鯉鯽魚”,這種魚有“胡須”,生長快,完全像鯉魚,但它的側(cè)線鱗片數(shù)和脊椎骨的數(shù)目與鯽魚相同,而且魚味鮮美不亞于鯽魚。這種人工克隆新魚種的出現(xiàn)為魚類育種開辟了新途徑。
對科學(xué)的追求是永無止境的,魚類,兩棲類克隆的成功自然而然地使科學(xué)家把目光投向了哺乳類。美國和瑞士的科學(xué)家率先從灰色小鼠的胚胎細胞中取出細胞核,用這個核取代黑色小鼠受精卵細胞核。實際上,這個黑色小鼠的受精卵在精細胞核剛進入卵細胞后,就把精細胞核連同卵細胞的核一起除去。灰鼠胚胎細胞的核移人黑色小鼠的去核受精卵后,在試管里人工培養(yǎng)了四天,然后再把它植人白色小鼠的子宮內(nèi)、經(jīng)幾百次灰、黑、白這樣的操作以后,白色小鼠終于生下了三只小灰鼠。
1996年2月27日出版的英國“自然”雜志公布了愛丁堡羅斯林研究所威爾莫特等人的研究成果:經(jīng)過247次失敗之后,他們在前年7月得到了一只名為“多利”的克隆雌性綿羊。
“多利”綿羊是如何“創(chuàng)造”出來的呢?威爾莫特等學(xué)者先給“蘇格蘭黑面羊”注射促性腺素,促使它排卵,得到卵之后,立即用極細的吸管從卵細胞中取出核,與此同時,從懷孕三個月的“芬多席特”六齡母羊的乳腺細胞中取出核,立即送入取走核的“蘇格蘭黑面羊”的卵細胞中,手術(shù)完成之后,用相同頻率的電脈沖刺激換核卵,讓“蘇格蘭黑面羊”的卵細胞質(zhì)與“芬多席特”母羊乳腺細胞的核相互協(xié)調(diào),使這個“組裝”細胞在試管里經(jīng)歷受精卵那樣的分裂、發(fā)育而形成胚胎的過程,然后,將胚胎巧妙地植人另一只母羊的子宮里。到去年7月,這只“護理”體外形成胚胎的母羊終于產(chǎn)下了小綿羊“多莉”。“多莉”不是由母羊的卵細胞和公羊的精細胞受精的產(chǎn)物,而是“換核卵”一步一步發(fā)展的結(jié)果,因此是“克隆羊”。
“克隆羊”的誕生,在世界各國引起了震驚,它難能可貴之處在于換進去的是體細胞的核,而不是胚胎細胞核。這個結(jié)果證明:動物體中執(zhí)行特殊功能、具有特定形態(tài)的所謂高度分化的細胞與受精卵一樣具有發(fā)育成完整個體的潛在能力。也就是說,動物細胞與植物細胞一樣,也具有全能性。
克隆技術(shù)會給人類帶來極大的好處,例如,英國PPL公司已培育出羊奶中含有治療肺氣腫的a-1抗胰蛋白酶的母羊。這種羊奶的售價是6千美元一升。一只母羊就好比一座制藥廠,用什么辦法能最有效、最方便地使這種羊擴大繁殖呢?最好的辦法就是“克隆”。同樣,荷蘭PHP公司培育出能分泌人乳鐵蛋白的牛,以色列LAS公司育成了能生產(chǎn)血清白蛋白的羊,這些高附加值的牲畜如何有效地繁殖?答案當(dāng)然還是“克隆”。
母馬配公驢可以得到雜種優(yōu)勢特別強的動物——騾,騾不能繁殖后代,那么,優(yōu)良的騾如何擴大繁殖?最好的辦法也是“克隆”,中國的大熊貓是國寶,但自然交配成功率低,因此已瀕臨絕種。如何挽救這類珍稀動物?“克隆”為人類提供了切實可行的途徑。
克隆動物還對于研究癌生物學(xué)、研究免疫學(xué)、研究人的壽命等都有不可低估的作用。
不可否認(rèn),“克隆綿羊”的問世也引起了許多人對“克隆人”的興趣,例如,有人在考慮,是否可用自己的細胞克隆成一個胚胎,在其成形前就冰凍起來。在將來的某一天,自身的某個器官出了問題時,就可從胚胎中取出這個器官進行培養(yǎng),然后替換自己病變的器官,這也就是用克隆法為人類自身提供“配件”。
有關(guān)“克隆人”的討論提醒人們,科技進步是一首悲喜交集的進行曲??萍荚桨l(fā)展,對社會的滲透越廣泛深入,就越有可能引起許多有關(guān)的倫理、道德和法律等問題。我想用諾貝爾獎獲得者,著名分子生物學(xué)家J.D.沃森的話來結(jié)束本文:“可以期待,許多生物學(xué)家,特別是那些從事無性繁殖研究的科學(xué)家,將會嚴(yán)肅地考慮它的含意,并展開科學(xué)討論,用以教育世界人民。”