(一)細胞增殖法
IL-2可刺激某些淋巴細胞增殖,根據(jù)細胞增殖情況可反映IL-2的活性,結果以U/ml表示。目前所用的IL-2反應細胞主要有CTLL、CTB6、F12、CTLL-2等小鼠IL-2依賴細胞株以及ConA活化的小鼠淋巴母細胞和小鼠胸腺細胞。這類細胞的增殖情況均可通過顯微鏡下直接計數(shù)、3H-TdR摻入法以及MTT法加以測定。
1.依賴性細胞株增殖法IL-2依賴細胞株在IL-2存在時才能生長,而對PHA、ConA等促有絲分裂原及IL-2以外的其它細胞因子均無反應。CTLL-2對IL-2的依賴性最強,表現(xiàn)為在單獨培養(yǎng)時3H-TdR的摻入量低,而在IL-2存在時摻入值高,故為首選的靶細胞株。醫(yī)學教|育網(wǎng)搜集整理
2.T淋巴母細胞增殖法T細胞經(jīng)植物血凝素激發(fā)轉化為T淋巴母細胞,并表達豐富的IL-2受體,在體外IL-2存在時持續(xù)增殖,并與IL-2含量呈劑量依賴關系。
3.胸腺細胞增殖法IL-2可以增另ConA的促有絲分裂原作用而引起T血細胞大量增殖。將一定數(shù)量的小鼠胸腺細胞與亞刺激量的ConA和不同稀釋的待檢標本共育,在一定時間后檢測IL-2增殖情況即能代表IL-2的活性。胸腺細胞增殖試驗是目前檢測IL-2活性最簡便的方法。此法缺點是敏感性較差,如待測標本中存留有ConA會出現(xiàn)較強的非特異性反應等。
(二)免疫學檢測法
根據(jù)抗原-抗體反應的原理,可利用抗IL-2的單克隆或多克隆抗體直接測定樣品中的IL-2含量,結果用ng/ml表示。本法在rIL-2生產(chǎn)制備過程中可用以跟蹤檢測,在rIL-2基因克隆時亦可對陽性質粒進行初步篩選。
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