一、分光光度技術(shù)的定性方法

　　對待測物質(zhì)進(jìn)行定性分析的依據(jù)是最大吸收波長λmax和摩爾吸光系數(shù)ε。

　　1.最大吸收波長λ_max方法

　　將不同波長的光透過待測物溶液測定其吸光度，用波長和吸光度作圖可找出最大吸收峰，其相應(yīng)的波長為最大吸收波長λ_max，和標(biāo)準(zhǔn)品的λ_max相比較，可對待測物質(zhì)進(jìn)行定性分析。

　　2.摩爾消光系數(shù)ε方法

　　準(zhǔn)確配制待測物質(zhì)的溶液，在最大吸收波長處測定其吸光度值，根據(jù)Lambert-Beer定律ε＝A／（L×C），可計算出待測物的ε，和已知ε的標(biāo)準(zhǔn)液相比較，可對待測物質(zhì)進(jìn)行定性分析。

　　二、分光光度技術(shù)的定量方法

　　1.標(biāo)準(zhǔn)曲線法

　　根據(jù)Lambert-Beer定律，液體的濃度在一定范圍內(nèi)與吸光度成正比關(guān)系。配制一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液（濃度應(yīng)包含高、中、低濃度范圍），按標(biāo)本處理方法作相同處理，在特定波長下測定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，按最小二乘法的原理，將對應(yīng)各點連成一條通過原點的直線，這條直線稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測溶液測定吸光度后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可查出其相應(yīng)的濃度。

　　制作和應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)注意下面幾點：

　?。?）測定條件發(fā)生變化時（如更換標(biāo)準(zhǔn)品和試劑等），應(yīng)重新繪制。

　　（2）標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)有高的純度，標(biāo)準(zhǔn)液的配制應(yīng)準(zhǔn)確。

　　（3）當(dāng)待測液吸光度超過線性范圍時，應(yīng)將標(biāo)本稀釋后再測定。

　?。?）標(biāo)本測定的條件應(yīng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時的條件完全一致醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理。

　　2.比較法

　　已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本作同樣處理，使用相同的空白，同時測定標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)本的吸光度，根據(jù)測定的吸光度及標(biāo)準(zhǔn)品濃度，可直接計算出標(biāo)本的濃度，計算公式為：

　　Cu＝（Au×Cs）／As

　　其中Cu和Au為標(biāo)本管濃度和吸光度，Cs和As分別為標(biāo)準(zhǔn)管濃度和吸光度。用標(biāo)準(zhǔn)品法定量時，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度應(yīng)盡量和標(biāo)本管濃度相近。

　　3.其它分析方法

　　包括差示法、多組分混合物分析和利用摩爾吸光系數(shù)分析等方法。