免疫分析技術(shù)具有高度的準(zhǔn)確性和特異性,因而在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域中倍受重視,發(fā)展迅速,成為檢驗(yàn)方法中最為重要的技術(shù)之一。隨著抗體和抗原制備技術(shù)的成熟及標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展和完善,免疫分析技術(shù)作為疾病診斷的主要手段已被廣泛應(yīng)用于機(jī)體免疫功能、腫瘤標(biāo)志物、內(nèi)分泌功能、傳染性疾病、治療藥物監(jiān)測(cè)、過(guò)敏原檢測(cè)等體外診斷實(shí)驗(yàn)中,其中血凝技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)技術(shù)、放射免疫分析技術(shù)、熒光免疫分析及膠體金技術(shù)等已被大量地應(yīng)用于檢驗(yàn)科的日常工作中。
由于臨床檢驗(yàn)工作量不斷增加,疾病傳染性對(duì)工作人員構(gòu)成的危險(xiǎn)因素加大,同時(shí)對(duì)工作效率要求越來(lái)越高,因此對(duì)檢驗(yàn)自動(dòng)化要求越迫切。七十年代起自動(dòng)生化分析儀開(kāi)始出現(xiàn)在臨床實(shí)驗(yàn)室,到了九十年代免疫分析技術(shù)已日趨成熟,熒光偏振、時(shí)間分辯熒光、電化學(xué)發(fā)光等分析技術(shù)不斷引入到免疫分析系統(tǒng),這些免疫分析技術(shù)不但有較高靈敏度,而且特異性也較好,具有一定的抗干擾能力。
1、熒光偏振(FPIA):用熒光素標(biāo)記的示蹤物與分析物的復(fù)合體經(jīng)單一平面偏振光照射后,可發(fā)出單一平面的偏振熒光,此熒光在特定偏振面的強(qiáng)度與復(fù)合體受激發(fā)時(shí)的轉(zhuǎn)動(dòng)速度成反比,而轉(zhuǎn)動(dòng)速度與分子量的大小成反比。當(dāng)熒光標(biāo)記的示蹤物與分析物的復(fù)合體結(jié)合后,分體對(duì)相應(yīng)大分子抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合,使游離的復(fù)合體增多,而復(fù)合體轉(zhuǎn)動(dòng)速度較高,這樣在特定偏振面上檢測(cè)到的熒光強(qiáng)度較低,反之檢測(cè)到的熒光強(qiáng)度就會(huì)較高。因此通過(guò)檢測(cè)在特定偏振面上的熒光強(qiáng)度的高低就可得到待檢血清中分析物的濃度。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏高,線性范圍廣,有較好的精確度。此項(xiàng)技術(shù)的專利已被雅培公司買斷,醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理他們生產(chǎn)的IMX、AXSYM免疫分析系統(tǒng)均采用此種原理的免疫分析系統(tǒng)。
2、時(shí)間分辯熒光(TRFIA):這是由芬蘭EG&G公司生產(chǎn)的自動(dòng)免疫分析儀率先采用的檢測(cè)原理。原理和熒光免疫分析基本相同,只是標(biāo)記物和信號(hào)的測(cè)量不同。采用三價(jià)稀土離子做示蹤劑,如:EU3+,SM3+等。稀土離子通過(guò)螯合劑與抗體分子上的游離氨基共價(jià)結(jié)合,形成稀土離子-螯合劑-抗體標(biāo)記螯合物,用建立雙抗體夾心免疫分析。當(dāng)采用酸性增強(qiáng)液將稀土離子從免疫復(fù)合物中解離出來(lái),并與增強(qiáng)液中的主要成份形成微囊,當(dāng)被激發(fā)光激發(fā)后,稀土離子可以發(fā)出長(zhǎng)壽命的極強(qiáng)的熒光信號(hào)。主要優(yōu)點(diǎn)為1、由于稀土離子熒光激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬,發(fā)射光波窄,激發(fā)光和發(fā)射光之間有較大的位移,因此有利于提高激發(fā)能。排除非特異熒光干擾,增強(qiáng)熒光信號(hào)的特異性。2稀土離子標(biāo)記螯合物具有較高的穩(wěn)定性,標(biāo)記離子不易脫落,穩(wěn)定期可達(dá)1-2年。3、由于稀土離子螯合物所產(chǎn)生的熒光不僅強(qiáng)度高,而且壽期長(zhǎng),因此利用延緩測(cè)量時(shí)間,可以排除待測(cè)樣本或試劑中短壽合的自然熒光干擾。
3、電化學(xué)發(fā)光(ECL):基本原理與化學(xué)發(fā)光相同,醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理與普通化學(xué)發(fā)光技術(shù)的不同在于采用特殊的標(biāo)記物:聯(lián)吡啶釕(Ru(bpy))2+.在三丙胺陽(yáng)離子自由(TPA+)的催化及脈沖電壓的激發(fā)下,此標(biāo)記物可產(chǎn)生高效、穩(wěn)定的邊續(xù)發(fā)光。同時(shí),由于(Ru(bpy))2+.在反應(yīng)中可循環(huán)利用,使發(fā)光得以增強(qiáng)和穩(wěn)定。這種方法的主要優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)記物分子小且穩(wěn)定性較好,發(fā)光強(qiáng)度高,發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)。德國(guó)寶靈曼公司ELECSYS系列的自動(dòng)免疫分析儀就是采的電化學(xué)發(fā)光原理。
4、增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光(EC):將生物素化的(Biotinylated)第一抗體通過(guò)親合素(Streptavidin)包被于反應(yīng)杯內(nèi)表面上,當(dāng)待測(cè)物與之結(jié)合后,再加入用辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)標(biāo)記的第二抗體,與普通化學(xué)發(fā)光原理不同之處是采用了一種特殊的催化劑與發(fā)光醇(Luminol)及其它試劑一道加入后,可使辣根過(guò)氧化物酶氧化發(fā)光醇的反應(yīng)速度提高103倍以上。從而使方法學(xué)的靈敏度大大提高。美國(guó)強(qiáng)生公司擁有一種特殊增強(qiáng)劑的專利,并新推出的VITROS Eci全自動(dòng)免疫分析儀。
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