透射比濁法的基本原理是測定一定體積的溶液通過的光線量,當(dāng)光線通過時(shí),由于溶液中存在的抗原抗體復(fù)合物粒子對光線的反射和吸收,引起透射光的減少,測定的光通量和抗原抗體復(fù)合物的量成反比。
(一)原理
抗原抗體在一定緩沖液中形成免疫復(fù)合物(IC),當(dāng)光線透過反應(yīng)溶液時(shí),由于溶液內(nèi)復(fù)合物粒子對光線的反射和吸收,引起透射光減少,免疫復(fù)合物量越多,透射光越少,即光線吸收越多,可用吸光度表示。吸光度和復(fù)合物的量成正比,當(dāng)抗體量固定時(shí),與待檢抗原量成正比。用抗原標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,可測出待檢抗原含量。
(二)實(shí)驗(yàn)要求
1.溶液中存在的抗原抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大,分子太小則阻擋不了光線的通過醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
2.溶液中抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量要足夠多,如果數(shù)量太少,溶液濁度變化不大,對光通量的影響不大。
3.透射比濁是依據(jù)溶液中顆粒形成或增加而使透射光減弱的原理來定量檢測抗原,檢測仍需抗原抗體反應(yīng)的溫育時(shí)問,檢測時(shí)間較長。
4.檢測用抗體一般應(yīng)選擇高親和力的抗體,在檢測中要保證抗體過量。應(yīng)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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