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簡述流式細(xì)胞計的基本工作原理

2009-11-16 14:47 來源:
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  將待測細(xì)胞染色后制成單細(xì)胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室,不含細(xì)胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度,這樣,鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,組成一個圓形的流束,待測細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列,依次通過檢測區(qū)域。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束,垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下,產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。光散射信號在前向小角度進(jìn)行檢測,這種信號基本上反映了細(xì)胞體積的大??;熒光信號的接受方向與激光束垂直,經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個不同波長的熒光信號。

  這些熒光信號的強度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度,經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號,再通過A/D轉(zhuǎn)換器,將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號。計算機把所測量到的各種信號進(jìn)行計算機處理,將分析結(jié)果顯示在計算機屏幕上,也可以打印出來,還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進(jìn)一步分析醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。

  檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同有多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達(dá),其X軸為測量強度,Y軸為細(xì)胞數(shù)目。一般來說,流式細(xì)胞儀坐標(biāo)軸的分辨率有512或1024通道數(shù),這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定。對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù),既可以單獨顯示每個參數(shù)的直方圖,也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖。

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