分子生物學(xué)分型法又稱DNA分型法其靈敏度高,陳舊微量標(biāo)本可檢測,克服CDC和MLC的不足,前景廣闊。
(一)聚合酶鏈反應(yīng)與SSP分型法方法
采用一系列設(shè)計(jì)的特異性引物,作HLA基因PCR擴(kuò)增,一對特異性引物只能擴(kuò)增出結(jié)構(gòu)與其互補(bǔ)的基因片段,根據(jù)引物擴(kuò)增結(jié)果,能確定檢樣的基因型。
評價(jià):只需作PCR擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物檢測,快速簡便醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
(二)PCR-SS0分型法
序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSO)是PCR與雜交相結(jié)合的技術(shù)。關(guān)鍵:預(yù)先知道Ⅱ類基因的核苷酸序列,設(shè)計(jì)出恰當(dāng)?shù)奶结槨Tu價(jià):需合成大量DNA探針,操作步驟多,適合大規(guī)模分型和配型。
(三)RFLP與PCR-RFLP分型法
限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析,是最早建立的研究HLA多態(tài)性的DNA分型技術(shù)。
方法:PCR擴(kuò)增的基因片段→等位特異的內(nèi)切酶消化→切成長度不一、數(shù)量不等的基因片段→電泳分離,根據(jù)一系列內(nèi)切酶解格局可確定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的基因型。
關(guān)鍵:預(yù)知Ⅱ類基因的核苷酸序列,并據(jù)此找到合適的內(nèi)切酶。
評價(jià):不需同位素,簡便,適合小規(guī)模分型醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
(四)PCR-SSCP分型法
單鏈構(gòu)象特異性-聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSCP),是以待測基因PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ),對擴(kuò)增的DNA單鏈進(jìn)行多態(tài)性分析的HLA分型方法。該法簡單、快速、精確,已初步應(yīng)用于異基因骨髓移植的配型工作。
(五)SBT分型法
基于序列的HLA分型法,是一種通過對擴(kuò)增后的HLA基因片段進(jìn)行核酸序列測定,從而判斷HLA型別的方法。
方法:PCR擴(kuò)增出的HLA基因片段純化,自動測序儀測序。
評價(jià):直接、精確、價(jià)格昂貴,主要用于新等位基因的鑒定。
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