方法:補(bǔ)體依賴的微量細(xì)胞毒試驗(yàn)(CDC)。分型抗原:SD抗原,包括HLA-A、B、C、DR、DQ.
(一)原理
標(biāo)準(zhǔn)血清+淋巴細(xì)胞,形成抗原抗體復(fù)合物,加入補(bǔ)體,在補(bǔ)體的作用下,細(xì)胞被溶解。溶解的細(xì)胞可被加入的染料(臺(tái)盼藍(lán)、伊紅)著染,即為陽性反應(yīng),計(jì)數(shù)死細(xì)胞數(shù),作出結(jié)果判斷。
(二)技術(shù)要點(diǎn)
1.CDC試驗(yàn)的關(guān)鍵在于獲得標(biāo)準(zhǔn)抗血清,與AB0血型抗體不同,主要獲自經(jīng)產(chǎn)婦。
2.抗血清種類應(yīng)覆蓋本民族、本地區(qū)80%以上的抗原醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
3.Ⅱ類抗原,僅分布于B細(xì)胞或巨噬細(xì)胞表面,故檢測(cè)Ⅱ類抗原應(yīng)分純B細(xì)胞。
4.注意下列假象:①粒細(xì)胞和單核細(xì)胞能夠非特異性地,吞噬染料而造成著染假象,應(yīng)注意細(xì)胞形態(tài)的區(qū)別。②血小板與淋巴細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng),結(jié)合HLA抗體而導(dǎo)致假陰性結(jié)果,可用玻璃珠脫纖維抗凝。③紅細(xì)胞沾染易致假陽性。④單克隆抗體復(fù)合物不能激活補(bǔ)體,不能用于CDC,可改用ELISA、FCM.
(三)臨床應(yīng)用
1.HLA配型可用于器官移植與相關(guān)疾病的診斷研究。
2.HLA交叉配型即用CDC法檢測(cè)受體血清有無針對(duì)供者HLA的抗體,以監(jiān)測(cè)排斥反應(yīng)的發(fā)生或估價(jià)受體的敏感性。
3.群體反應(yīng)性抗體的檢測(cè)(PRA)PRA用于判斷器官移植時(shí)受體的敏感程度。
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