經(jīng)熒光染色的細(xì)胞受合適的光激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光是通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號而進(jìn)行測量的。光電倍增管(PMT)最為常用。PMT的響應(yīng)時間短,僅為ns數(shù)量級;光譜響應(yīng)特性好,在200~900nm的光譜區(qū),光量子產(chǎn)額都比較高。光電倍增管的增益從103到108可連續(xù)調(diào)節(jié),因此對弱光測量十分有利。光電管運(yùn)行時特別要注意穩(wěn)定性問題,工作電壓要十分穩(wěn)定,工作電流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W;最大陽極電流在幾個毫安。此外要注意對光電管進(jìn)行暗適應(yīng)處理,并注意良好的磁屏蔽。在使用中還要注意安裝位置不同的PMT,因為光譜響應(yīng)特性不同,不宜互換。也有用硅光電二極管的,它在強(qiáng)光下穩(wěn)定性比PMT好醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理。
從PMT輸出的電信號仍然較弱,需要經(jīng)過放大后才能輸入分析儀器。流式細(xì)胞計中一般備有兩類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關(guān)系,稱為線性放大器。線性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信號以及代表生物學(xué)線性過程的信號,如DNA測量等。另一類是對數(shù)放大器,輸出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關(guān)系。在免疫學(xué)測量中常使用對數(shù)放大器。因為在免疫分析時常要同時顯示陰性、陽性和強(qiáng)陽性三個亞群,它們的熒光強(qiáng)度相差1~2 個數(shù)量級;而且在多色免疫熒光測量中,用對數(shù)放大器采集數(shù)據(jù)易于解釋。此外還有調(diào)節(jié)便利、細(xì)胞群體分布形狀不易受外界工作條件影響等優(yōu)點。
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