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實時PCR檢測HSV-2的方法學(xué)建立

2009-03-17 14:15 來源:
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  摘 要:目的建立一種快速、特異、準確定量的單純皰疹病毒2型(HSV-2)檢測方法。

  方法 構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD18-T-gG作為標準品。以HSV-2的gC基因區(qū)為靶基因區(qū),設(shè)計合成引物和探針,采用TaqMan MGB技術(shù)對HSV-2進行實時定量PGR檢測,優(yōu)化反應(yīng)體系,并進行方法學(xué)評價。

  結(jié)果 成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD18-T-gG.建立利用TaqMan MGB技術(shù)的real-time PGR方法,其重復(fù)性較好[批內(nèi)CV(變異系數(shù))值為2.29%,批間CV值為4.76%]、特異性較好(對HSV-1、Veto細胞、巨細胞病毒、弓形蟲等無特異性擴增)、線性范圍好(4.75×101~4.75×106 copies/μl,r=0.998),靈敏度達到47.5 copies/μl;與ELISA法進行比較,認為前者的靈敏度更高、檢測時間更短。

  結(jié)論 建立的TaqMan MGB PGR方法能夠快速準確、特異、靈敏地對HSV-2進行定量分析,可為臨床診斷提供幫助。

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