摘 要：目的為了研究新發(fā)現(xiàn)的人epsilon干擾素（hIFN-ε）的生物學(xué)活性，我們通過(guò)RT-PCR克隆了hIFN-ε基因，并構(gòu)建pcDNA3.1/myc-his（-）A-hIFN-ε（以下簡(jiǎn)稱pcDNA3.1A-hIFN-ε）的真核表達(dá)載體，在CHO細(xì)胞中表達(dá)，并研究真核細(xì)胞重組表達(dá)的rhIFN-ε的生物學(xué)活性。

　　方法 用TNF-α刺激人宮頸癌HeLa細(xì)胞，抽提總RNA，經(jīng)RT-PCR獲得全長(zhǎng)cDNA，與pcDNA3.1/myc-his（-）A真核表達(dá)載體連接，構(gòu)建重組體pcDNA3.1A-hIFN-ε，并在CHO細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，采用微量細(xì)胞病變抑制試驗(yàn)研究表達(dá)產(chǎn)物中的rhIFN-ε對(duì)多種病毒的抗病毒活性；MTT法檢測(cè)其對(duì)A375、HeLa和A549細(xì)胞的生長(zhǎng)影響，并通過(guò)在Wish、HeLa、A375細(xì)胞中誘導(dǎo)MxA抗病毒蛋白的產(chǎn)生研究hIFN-ε的抗病毒機(jī)制。

　　結(jié)果 經(jīng)PCR和限制性酶切鑒定以及DNA測(cè)序，結(jié)果表明已經(jīng)成功構(gòu)建了重組體pcDNA3.1A-hIFN-ε，并在CHO細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)了rhIFN-ε蛋白，該蛋白具有抗HSV-Ⅰ、PolioV、Ad3和VSV病毒的作用，能夠抑制HeLa、A375、A549細(xì)胞的生長(zhǎng)，刺激Wish、HeLa、A375細(xì)胞產(chǎn)生MxA蛋白。

　　結(jié)論 本研究成功地構(gòu)建了pcDNA3.1A-hIFN-ε真核表達(dá)載體并在CHO細(xì)胞中獲得穩(wěn)定表達(dá)，證明了rhIFN-ε蛋白具有抗病毒和抗增殖活性，其抗病毒效應(yīng)的分子機(jī)理可能與誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生MxA抗病毒蛋白有關(guān)，為今后研究rhIFN-ε的生物學(xué)功能和基因重組藥物研制及其開(kāi)展基因治療奠定了基礎(chǔ)。