凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)是利用可溶性抗原和相應(yīng)抗體在凝膠內(nèi)擴(kuò)散，形成濃度梯度，在抗原與抗體濃度比例恰當(dāng)?shù)奈恢眯纬扇庋劭梢姷某恋砭€或沉淀環(huán)。

　　凝膠支持物的種類：凝膠支持物的種類有瓊脂、瓊脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝膠等。不同分子量的物質(zhì)在凝膠中擴(kuò)散速度不同，藉此可用以識(shí)別不同待測(cè)物分子量的差別。

　　1.單向擴(kuò)散試驗(yàn)：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測(cè)抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，如抗原醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理和相應(yīng)抗體結(jié)合，則形成沉淀環(huán)。

　　（1）試管法：將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中，注入小試管內(nèi)，上層加抗原溶液使待測(cè)抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，在抗原抗體比例恰當(dāng)位置形成沉淀環(huán)。

　?。?）平板法：是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴(kuò)散，24～48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測(cè)定環(huán)的直徑或面積計(jì)算標(biāo)本中待測(cè)抗原的濃度。有兩種計(jì)算方法：

　　1）Mancini曲線：適用大分子抗原的和長時(shí)間擴(kuò)散（>48h）的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系c／d2=k。（其中c為抗原濃度，d為沉淀環(huán)直徑，k為常數(shù)）

　　上排為5個(gè)不同的參考：中、下排為病人標(biāo)本，下排右2為一個(gè)異常標(biāo)本（出現(xiàn)明顯擴(kuò)散環(huán)）

　　2）Fahey曲線：適用于小分子抗原和較短時(shí)間擴(kuò)散的結(jié)果處理，用半對(duì)數(shù)紙劃線，濃度對(duì)數(shù)與擴(kuò)散環(huán)直徑呈線性關(guān)系

　　log c／d=k。

　?。ㄆ渲衏為抗原濃度，d為沉淀環(huán)直徑，k為常數(shù)）

　　單向擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)時(shí)的注意點(diǎn)：

　　1）抗血清必須特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力強(qiáng)，在良好條件下保存。

　　2）每次測(cè)定都必須作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　3）每次測(cè)定時(shí)必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。

　　4）注意雙環(huán)現(xiàn)象（出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分）。

　　5）應(yīng)用單克隆抗體測(cè)量多態(tài)性抗原時(shí)，測(cè)定值偏低；用多克隆抗體測(cè)量單克隆病時(shí)，測(cè)定值偏高。

　　2.雙向擴(kuò)散試驗(yàn)：在瓊脂內(nèi)抗原和抗體各自向?qū)Ψ綌U(kuò)散，在最恰當(dāng)?shù)谋壤幮纬煽乖t(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理抗體沉淀線，根據(jù)沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可對(duì)抗原或抗體作出定性分析。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)也分為試管法和平板法。

　?。?）試管法：在含有抗原的溶液和含有抗體瓊脂中間，加一層普通瓊脂，讓下層抗體和上層抗原向中間自由擴(kuò)散，在抗原、抗體濃度最適時(shí)形成沉淀線。

　?。?）平板法：是在瓊脂板上相距3～5mm打一對(duì)孔，或者梅花孔、雙排孔、三角孔等。在相應(yīng)孔中加入抗原或抗體，待其自由擴(kuò)散后，抗原、抗體形成可見的沉淀線。根據(jù)沉淀線的位置可作如下分析：

　　①抗原、抗體是否存在及其相對(duì)含量。一般沉淀線靠近抗原孔，提示抗體量大，沉淀線靠近抗體孔，提示抗原量大。

　　②抗原、抗體相對(duì)分子量的分析；抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量影響。分子量小者，擴(kuò)散快，反之較慢。由于慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度較大，形成沉淀線彎向分子量大的一方。如若兩者分子量相等，則形成直線。

　　見圖22。

　　左側(cè)沉淀線抗原分子量大于抗體，右側(cè)沉淀線則抗體分子量大于抗原，而中間沉淀線則兩者分子量相等。

　?、劭乖再|(zhì)的分析，受檢的抗原性質(zhì)可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分別出現(xiàn)完全融合、部分融合、不融合三種情況；

　　見圖23。

　　左圖：兩種受檢抗原（Ag-a）完全相同，形成一條完全融合沉淀線

　　中圖：左側(cè)抗原Ag-ab，右側(cè)抗原Ag-ac，兩者都有a決定簇，抗體為雙價(jià)，形醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理成部分融合沉淀線，說明兩種抗原有相關(guān)成分。

　　右圖：抗體為雙價(jià)，抗原Ag-a和Ag-c完全不同。

　　④抗體效價(jià)的滴定。抗體效價(jià)是抗原、抗體經(jīng)過自由擴(kuò)散形成沉淀線，出現(xiàn)沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價(jià)。