1.放射免疫分析(RIA)基本原理:其原理為標記抗原(Ag*)和非標記抗原(Ag)對有限量特異性抗體競爭性結合反應。
Ag*是試劑成分,而Ag是待測抗原,Ab也是試劑中成分。 Ag*和Ab的量是固定微量的,而待測的Ag量是不固定的。
解釋:如果將Ag*-Ab復合物與游離(剩余的)Ag*分開,分別測定它們的放射性,就可算出結合態(tài)的標記抗原(B:Ag*-Ab復合物中的Ag*)與游離態(tài)的標記抗原(F:單獨、剩余的Ag*)的比值(B/F),或算出結合率[B/(B+F)],它們與待測Ag量呈函數關系(反比關系)。
2.劑量反應曲線:劑量反應曲線又稱標準曲線,即用標準物濃度(Ag)對結合率[B/(B+F)]作圖。在RIA中被測定物質的濃度(量)可從標準曲線上查得;同時標準曲線又是驗證方法的靈敏度、檢驗抗血清質量和鑒定標準品純度的主要依據。隨著計算機的普及,可通過計算機的放免處理程序來繪制標準曲線。
3.測定方法:RIA測定方法分三個步驟即:①待測標本中未標記抗原,標記抗原和抗體進行競爭抑制反應;②將標記抗原和抗體相結合的復合物(B)和未結合的標記抗原(F)的分離(分離方法有第二抗體法、聚乙二醇沉淀法、PR法、活性炭吸附法等);③對B進行放射性強度的測定(B為標記抗原抗體復合物,F為游離標記抗原)。根據標準曲線醫(yī)學教育網整理查得待測抗原濃度。