(一)生物素及其活化
1.標(biāo)記蛋白質(zhì)氨基的活化生物素:N-羥基丁二酰亞胺酯(BNHS)。
2.標(biāo)記蛋白質(zhì)醛基的活化生物素:酰肼(BHZ)和肼化生物胞素(BCHZ)。
3.標(biāo)記蛋白質(zhì)巰基的活化生物素:3-(N-馬來酰亞胺-丙酰)-生物胞素(MPB)。
4.標(biāo)記蛋白質(zhì)核酸的活化生物素:常用于標(biāo)記核酸分子的活化生物素有光生物素、生物素脫氧核苷三磷酸、BNHS和BHZ。
(二)生物素標(biāo)記蛋白質(zhì)
生物素化蛋白質(zhì)衍生物的特性生物素化蛋白質(zhì)衍生物有兩類:一種是生物素化的大分子生物活性物質(zhì)(如抗原、抗體),另一種是標(biāo)記材料(如酶)結(jié)合生物素后制成的標(biāo)記物。
標(biāo)記方法:(1)標(biāo)記抗體、抗原:常用于標(biāo)記抗體的活化生物醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理是BNHS;對于偏酸性的抗原,標(biāo)記時多采用BHZ。(2)標(biāo)記酶:以生物素標(biāo)記HRP為例。
標(biāo)記注意事項:(1)應(yīng)根據(jù)抗原或抗體分子結(jié)構(gòu)中所帶可標(biāo)記基團的種類以及分子的理化性質(zhì),選擇相應(yīng)的活化生物素和反應(yīng)條件;(2)標(biāo)記反應(yīng)時,活化生物素與待標(biāo)記抗原或抗體應(yīng)有適當(dāng)?shù)谋壤?;?)為減少空間位阻影響,可在生物素與被標(biāo)記物之間加入交聯(lián)臂樣結(jié)構(gòu);(4)生物素與抗原、抗體等蛋白質(zhì)結(jié)合后,不影響后者的免疫活性;標(biāo)記酶時則結(jié)果有不同。