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膠體金標記免疫電鏡技術

2009-09-24 13:46 來源:
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  標記金標法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環(huán)境中帶有負電的性質(zhì),使其與抗體相吸附,從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時,在光鏡水平膠金液呈現(xiàn)鮮艷的櫻紅色,不需加外進行染色。在電鏡水平,金顆粒具有很高的電子密度,清晰可辨。因此,免疫電鏡膠體金標記法近年來被成功地應用于生物學的各個方面,并取得了可喜的進展,解決了一些過去未能解決的問題,80年代以來似有取代免疫電鏡PAP技術的趨勢。膠體金標記抗體技術在電鏡水平應用有許多優(yōu)點:首先,手續(xù)不如PAP法煩瑣,不需用H202等損傷微細結(jié)構(gòu)的處理步驟,對微細結(jié)構(gòu)的影響較少。其次,金醫(yī)學教.育網(wǎng)搜集整理顆粒具有很高的電子密度,在電鏡下金顆粒清晰可辨,易于與其他免疫產(chǎn)物相區(qū)別。

  因此,金標法還可以和PAP法相結(jié)合進行雙重或多重染色的超微結(jié)構(gòu)定位。另外。利用不同直徑的金顆粒標記不同的抗體,是研究突觸小泡內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)共存的有力工具。由于抗原抗體反應部位結(jié)合金顆粒數(shù)量的多少可進行粗略的免疫細胞化學定量研究。金標抗體還可加入培養(yǎng)液中,對培養(yǎng)細胞內(nèi)抗原進行標記定位。曾有報告用金標記法于細胞內(nèi)骨架的研究獲滿意的效果。由于金具有強烈的繼發(fā)電子的能力,因此,不僅可以用于透射電鏡的超薄切片觀察,也可以用于掃描電鏡對細胞表面的抗原、受體進行標記定位觀察。金標液無毒性,對人體無損傷。

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