取肝素抗凝血經(jīng)分層液(比重1.077)離心分離單個核細胞,配成一定的濃度加入塑料培養(yǎng)板孔中溫育1-3小時,洗去未粘附細胞,然后每孔加入含一定濃度LPS的細胞培養(yǎng)液,繼續(xù)溫育一定時間,收集上清液檢測IL-1活性。
IL-1活性最常用的檢測法是小鼠胸腺細胞增殖反應。該法原理:IL-1可輔助ConA或PHA等刺激小鼠胸腺細胞的增殖,增殖細胞的DNA合成增加。在細胞培養(yǎng)結(jié)束前6小時加入3H-TdR,待培養(yǎng)結(jié)束時收集細胞,檢測放射性強度,即可判斷IL-1活性。由于IL-1能促進小鼠T細胞傳代株LBRM-33和EL-4分泌IL-2,當含IL-1待檢樣品加入上述細胞培養(yǎng)液,則培養(yǎng)上清IL-2增加,醫(yī)學教|育網(wǎng)|收集整理再用IL-2依賴細胞株測定分泌IL-2的多少,可間接推測樣品中IL-1含量。其他IL的生物學檢測方法大致相同,增殖反應細胞常采用IL的依賴株。