辣根過氧化酶是檢驗技師考試的內容,醫(yī)學教育網(wǎng)搜集整理相關內容供大家參考。
辣根過氧化酶(HRP):HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,純化方法也不復雜。它是一種糖蛋白,含糖量約l8%;分子量為44kD;是一種復合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結合而成的一種卟啉蛋白質。主酶為無色糖蛋白,在275nm波長處有最高吸收峰;輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán),在403nm波長處有最高吸收峰。HRP對受氫體的專一性很高,除H202外,僅作用于小分子醇的過氧化物和尿素的過氧化物。后者為固體,作為試劑較H202方便。
許多化合物可 作為HRP的供氧體,在ELISA中常用的供氫體底物為鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和ABTS.OPD為在ELISA中應用最多的底物,靈敏度高,比色方便。其缺點是配成應用液后穩(wěn)定性差,而且具有致異變性。TMB無此缺點。TMB經(jīng)酶作用后由無色變藍色,目測對比鮮明;加酸停止酶反應后變黃色,可在比色計中定量;因此應用日見增多。ABTS,雖然靈敏度不如0PD和TMB,但空白值很低。