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血清學(xué)試驗(yàn)的特點(diǎn)

2011-08-27 14:52 來源:
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  (一)特異性和交叉性

  抗原抗體的特異性結(jié)合是指抗原分子上的抗原決定簇和抗體分子可變區(qū)結(jié)合的特異性,是由兩者之間空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)決定的??乖c相應(yīng)抗體的結(jié)合具有高度的特異性,主要依靠抗原分子上的抗原決定簇和抗體末端可變區(qū)的氨基酸排列和立體構(gòu)型,只有抗原決定簇的立體構(gòu)型和抗體分子的立體構(gòu)型完全吻合,才能發(fā)生反應(yīng)。如抗新城疫病毒的抗體只能與新城疫病毒結(jié)合,而不能與其他病毒結(jié)合。但較大分子的蛋白質(zhì)常含有多種抗原決定簇,如果兩種不同的抗原之間含有部分共同的抗原決定簇,則發(fā)生交叉反應(yīng)。如腸炎沙門氏菌的抗血清能凝集鼠傷寒沙門氏菌。一般來說親緣關(guān)系越近,交叉反應(yīng)的程度越高。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)高度特異性的特點(diǎn),在疾病診斷中可用抗原、抗體任何一方作為已知條件來檢測另一未知方。

  (二)敏感性

  抗原抗體的結(jié)合還具有高度敏感性的特點(diǎn),不僅可檢測定性,還可以定量檢測微量、極微量的抗原或抗體,其敏感度大大超過當(dāng)前所應(yīng)用的化學(xué)分析方法。血清學(xué)試驗(yàn)的敏感性視其種類而異(表11-1)。

表11-1 血清學(xué)試驗(yàn)敏感性比較

測定方法敏感性(每升)
雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)<1mg
火箭電泳<0.5mg
對流電泳<0.1mg
免疫電泳<5~10mg
凝集試驗(yàn)1μg
血凝抑制試驗(yàn)0.1μg
補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)0.1μg
放射免疫分析法<1pg
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)<1ng
定量免疫熒光分析<1pg

 

  (三)可逆性

  抗原與抗體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合,這種結(jié)合是可逆的,結(jié)合條件為0℃~40℃、pH4~9.如溫度超過60℃或pH降到3以下,或加入解離劑(如硫氰化鉀、尿素等)時,則抗原抗體復(fù)合物又可重新解離,并且分離后抗原或抗體的性質(zhì)仍不改變。

  免疫技術(shù)中的親合層析法,常用改變pH和離子強(qiáng)度促使抗原抗體復(fù)合物解離,從而純化抗原或抗體。

  (四)反應(yīng)的二階段性

  第一階段為抗原與抗體的特異性結(jié)合階段,此階段反應(yīng)快、僅數(shù)秒至數(shù)分鐘,但不出現(xiàn)可見反應(yīng)。第二階段為可見階段,這一階段抗原抗體復(fù)合物在環(huán)境因素(如電解質(zhì)、pH、溫度、補(bǔ)體)的影響下出現(xiàn)各種可見反應(yīng),如表現(xiàn)為凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合等。此階段反應(yīng)慢、需數(shù)分鐘、數(shù)十分鐘或更久。第二階段受電解質(zhì)、pH、溫度等因素的影響。

  (五)最適比例與帶現(xiàn)象

  大多數(shù)抗體為二價,抗原為多價,因此只有兩者比例合適時,才能形成彼此連接的大復(fù)合物,血清學(xué)反應(yīng)才出現(xiàn)凝集、沉淀等可見的反應(yīng)現(xiàn)象(圖11-1)。如果抗原過多或抗體過多,則抗原與抗體的結(jié)合不能形成大復(fù)合物,抑制可見反應(yīng)的出現(xiàn),稱為帶現(xiàn)象。當(dāng)抗體過量時,稱為前帶;抗原過多時,稱為后帶。為克服帶現(xiàn)象,在進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)時,需將抗原或抗體作適當(dāng)稀釋,通常是固定一種成分,稀釋另一種成分。

  (六)用已知測未知

  所有的血清學(xué)試驗(yàn)都是用已知抗原測定未知抗體,或用已知抗體測定未知抗原。在反應(yīng)中只能有一種材料是未知的,但可以用兩種或兩種以上的已知材料檢測一種未知抗原或抗體。

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