瑞氏染色法及其原理是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技士考試可能涉及到的知識(shí)點(diǎn)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編整理了相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，供考生參考。

Wrfeht和Giemsa都于1902年報(bào)告了各自的新的血液學(xué)染色劑，其主要特點(diǎn)是在制備多色性亞甲藍(lán)（主要指天青B）方面做了改進(jìn)，使血細(xì)胞和瘧原蟲(chóng)著色較好，操作簡(jiǎn)便。

上述染色法均是含伊紅和亞甲基藍(lán)衍生物的復(fù)合染料。在臨床檢驗(yàn)工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他體液、分泌物和排泄物涂片中各種細(xì)胞的染色，有利于在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)檢查。

【染色原理】

瑞氏染色分兩相進(jìn)行，第一相是酸性染料伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒等結(jié)合；堿性染料天青B與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)（chro－matin）、特異中性顆粒、血小板及富含核蛋白的胞質(zhì)結(jié)合。第二相是天青B和伊紅在適宜條件下形成紫色的天青B一伊紅復(fù)合物（azure B－eosin complex），這種復(fù)合物是形成Romanowsky－Giemsa效應(yīng)的基礎(chǔ)。

Romanowsky－Giemsa效應(yīng)包括：①白細(xì)胞核染色質(zhì)染成紫色，瘧原蟲(chóng)的染色質(zhì)染成紅色；②中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)染成紫色；③產(chǎn)生本效應(yīng)必須有兩種染料參與，一種是天青B，另一種是伊紅。

Wittekind（1985）指出，天青B與DNA分子中的磷酸基結(jié)合，而伊紅既與DNA分子中的陽(yáng)離子部位結(jié)合，又與天青B結(jié)合，與天青B的結(jié)合力來(lái)源于電子供一受體的電子轉(zhuǎn)移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）與伊紅分子中的叛基（－COOH）間形成氫鍵。因此，天青B是噻嗪類(lèi)染料中能與伊紅形成復(fù)合物的最佳選擇，因?yàn)閾碛兴膫€(gè)甲基側(cè)鏈的亞甲藍(lán)不能以氫鍵與伊紅結(jié)合。

甲醇除作為染料的溶劑，能將瑞氏染料解離成帶正電荷的天青B和帶負(fù)電荷伊紅外，因其具有脫水力，還可將細(xì)胞固定為一定形態(tài)，并使蛋白沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞與染料的接觸表面，增強(qiáng)染色效果。

細(xì)胞中的各種有機(jī)物質(zhì)（特別是蛋白質(zhì)）、染料等對(duì)環(huán)境的州值非常敏感。如環(huán)境偏酸，氫離子增多，降低對(duì)堿性染料的親和力；增強(qiáng)伊紅著色，出現(xiàn)異常紅染；相反，則可出現(xiàn)異常藍(lán)染。最佳環(huán)境應(yīng)維持在PH值6 4～6、8.因此，必須使用緩沖溶液。