維生素A醋酸酯。

　　等吸收法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3，使Aλ2= Aλ3=6/7 Aλ1.維生素A醇。

　?、垭s質(zhì)吸收：對維生素A的測定有影響的雜質(zhì)主要有：

　　維生素A2和維生素A3；維生素A的氧化產(chǎn)物（環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸）；維生素A在光照下產(chǎn)生的無生物活性的聚合物鯨醇；維生素A的異構(gòu)體；合成時產(chǎn)生的中間體。

　?、軠y定方法：第一法（使用于維生素A醋酸酯）

　　取維生素A醋酸酯，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml中含9～15單位的溶液。然后在300、316、328、340、360nm五個波長處分別測定吸收值，確定最大吸收波長（應為328nm）。計算各波長下的吸收度與328nm波長下的吸收度的比值。醫(yī)學教育網(wǎng)mississippidebtrecovery.com

　　計算：

　　a.求吸收系數(shù)，吸收系數(shù)＝A/cl. b.求效價（U/g），U/g＝吸收系數(shù)×1900 1900為維生素A醋酸酯在環(huán)己烷溶液中測定的換算因數(shù)。

　　3.求維生素A醋酸酯膠丸為標示量的百分含量。

　　標示量%＝（A×D×1900×W）/（W×100×l×標示量）

　　1U=0.344μg維生素A醋酸酯1U=0.300μg維生素A醇4.A值的選擇法第二法（適用于維生素A醇）

　　說明：

　　⑴維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程法（即代數(shù)法）推導出來的；維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（幾何法或成6/7定位法）推倒出來。

　?、圃趹萌c校正法時，除其中一點在最大吸收波長處測定外，其余兩點均在最大吸收峰的兩側(cè)上升或下降陡部的波長處進行測定。

　　維生素E維生素E（消旋-α-生育酚醋酸酯）有天然片和合成品之分，天然品為右旋體（d-α）；合成品為消旋體（dl-α）。

　　結(jié)構(gòu)：維生素E為苯丙二氫吡喃醇衍生物，苯環(huán)上又一個乙?；姆恿u基，故又稱生育酚。他主要有α、β、γ、δ四種異構(gòu)體，其中以α異構(gòu)體的生理作用最強。

　　性質(zhì)：

　　溶解性：微黃色或黃色透明的粘稠液體，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水。

　　具有紫外吸收。

　　在無氧或其它氧化劑存在時，在酸性或堿性溶液中，加熱可水解生成游離生育酚；在有氧或其它氧化劑存在時，則進一步氧化生成醌型化合物。在堿性條件下加熱，這種氧化作用更易發(fā)生。

　　鑒別試驗：

　?。?）硝酸反應：取本品約30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75℃加熱約15min，溶液應顯橙紅色。

　　（2）水解后氧化反應：取本品約10mg，加醇制氫氧化鉀試液2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml與乙醚10ml，振搖、靜置使分層，取乙醚液2ml，加2，2-聯(lián)吡啶的乙醇溶液（0.5→100）數(shù)滴和三氯化鐵的乙醇溶液（0.2→100）數(shù)滴，應顯血紅色。

　?。?）紫外光譜法。

　?。?）薄層色譜法。

　　特殊雜質(zhì)：

　　游離維生素E.利用游離維生素E的還原性，用硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）滴定，以二苯胺為指示劑，限量為2.15%.含量測定：

　?。?）氣相色譜法：載氣：氮氣；固定相：硅酮（OV-17），涂布于經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅藻土或高分子小球上；檢測器：氫火焰離子化檢測器；理論板數(shù)：按維生素E峰計算應不低于500；維生素E與內(nèi)標物質(zhì)的分離度應大于2.內(nèi)標：正三十二烷。

　　（2）高效液相色譜法：C18柱；流動相為甲醇：水（49：1）；紫外檢測器；波長292nm.維生素B1結(jié)構(gòu)：維生素B1（鹽酸硫胺）是由氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過央甲基連接而成的季銨化合物，噻唑環(huán)上季銨及嘧啶環(huán)上氨基，為兩個堿性基團，可與酸成鹽。

　　性質(zhì)：

　　溶解性：本品在水中易溶，水溶液顯酸性反應。在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。

　　具有紫外吸收。

　　在堿性中遇氧化劑，如鐵氰化鉀，可被氧化為具有熒光的硫色素，后者溶液正丁醇中呈藍色熒光。

　　分子中含有兩個雜環(huán)，故可與某些生物堿沉淀試劑反應生成組成恒定的沉淀。

　　鑒別試驗⑴硫色素反應方法：取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2min，放置使分層，上面的醇層顯強烈的藍色熒光。加酸使成酸性，熒光即消失。再加堿使成堿性，熒光又顯出。醫(yī)學教育網(wǎng)mississippidebtrecovery.com

　　原理：維生素B1在堿性溶液中，可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或異丁醇等）中，顯藍色熒光。

　?。?）沉淀反應維生素B1與碘化汞生成淡黃色沉淀維生素B1與碘生成紅色沉淀維生素B1與硅鎢酸生成白色沉淀含量測定方法有：硅鎢酸重量法、硫色素熒光法、非水溶液滴定法和紫外分光光度法。

　　中國藥典收載紫外分光光度法維生素C結(jié)構(gòu)：維生素C分子結(jié)構(gòu)中具有二烯醇結(jié)構(gòu)和內(nèi)酯環(huán)，且有二個手性碳原子（C₄、C₅），因此不僅使維生素C性質(zhì)極為活潑，且具旋光性。

　　性質(zhì)：

　　溶解性：維生素C在水中易溶，水溶液呈酸性，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。

　　結(jié)構(gòu)遇糖類相似，也具糖的性質(zhì)。

　　分子中二烯醇基具極強的還原性，易被氧化為二酮基而成為去氫抗維生素C，加氫又可還原為維生素C.在堿性溶液或強酸性溶液中能進一步水解為二酮古羅糖酸。

　　C₃-OH由于受共軛效應的影響，酸性較強；C₂-OH的酸性極弱，故維生素C一般表現(xiàn)為一元酸，能與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。

　　分子中有兩個手性碳原子，故有四個光學異構(gòu)體，其中L（+）-維生素C活性最強。

　　維生素C和碳酸鈉作用可生成單鈉鹽，不致發(fā)生水解，因雙鍵使內(nèi)酯環(huán)變得較穩(wěn)定；但在強堿中，內(nèi)酯環(huán)可水解，生成酮酸鹽。

　　維生素C有共軛雙鍵，在稀礦酸溶液中，在245nm波長處有最大吸收；若在中性或堿性條件下，則紅移至265nm處。

　　鑒別試驗：

　?。?）與硝酸反應方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加硝酸銀試液0.5ml，即生成銀的黑色沉淀。

　　原理：維生素C分子中有二烯醇基，具強還原性，可被硝酸銀氧化為去氫維生素C，同時可產(chǎn)生黑色銀沉淀。

　?。?）與2，6-二氯靛酚反應方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加2，6-二氯靛酚試液1～2滴，試液的顏色即消失。

　　原理：2.6-二氯靛酚為一染料，其氧化型在酸性介質(zhì)中為玫瑰紅色，堿性介質(zhì)中微藍色。與抗壞血酸作用后生成還原型的物色的酚亞胺。

　?。?）與其它氧化劑反應維生素C還可被亞甲藍、高錳酸鉀、堿性酒石酸銅試液、磷鉬酸等氧化劑氧化為去氫維生素C，同時，維生素C可使這些試劑褪色，產(chǎn)生沉淀或顯色。

　?。?）利用維生素C具糖類性質(zhì)的反應維生素C可在三氯醋酸或鹽酸存在下水解、脫羧，生成戊糖，再失水，轉(zhuǎn)變?yōu)榭啡?，加入吡咯，加熱?0℃產(chǎn)生藍色。

　?。?）紫外分光光度法維生素C在0.01mol/L鹽酸液中，在243nm波長處有唯一的最大吸收，利用此特征進行鑒別。

　　含量測定：

　　碘量法：溶劑：水和稀醋酸，指示劑：淀粉。

　　操作中加入稀醋酸10ml使滴定在酸性溶液中進行。在酸性介質(zhì)中維生素C受空氣中氧的氧化作用減慢，但樣品溶于稀酸后仍需立即進行滴定。

　　加新沸過的冷水液是為了減少水中溶解氧對測定的影響。

　　如片劑，溶解后應濾過，取續(xù)濾液測定；注射液測定時要加2ml丙酮，以消除注射液內(nèi)含有的抗氧劑亞硫酸氫鈉對測定的影響。

　　抗生素類藥物β-內(nèi)酰胺類抗生素本類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族，他們的分子結(jié)構(gòu)中均含有β-內(nèi)酰胺環(huán)。醫(yī)學教育網(wǎng)mississippidebtrecovery.com

　　基本結(jié)構(gòu)：

　　分子中都有一個游離羧基和酰胺側(cè)鏈。

　　青霉素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán)頭孢菌素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻嗪環(huán)性質(zhì)：

　　溶解度：青霉素和頭孢菌素分子中的游離羧基具有相當強的酸性，能與無機堿或某些有機堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水，而有機堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機溶劑。

　　旋光性：青霉素族分子中含有三個手性碳原子，頭孢菌素族含有兩個手性碳原子，都具有旋光性。

　　紫外吸收特性青霉素分子中的母核部分無紫外吸收，但出側(cè)鏈酰胺基上R如具苯環(huán)共軛系統(tǒng)，則有紫外吸收特性。

　　頭孢菌素由于母核部分具有O-C=N-C=C結(jié)構(gòu)，故有紫外吸收。

　　β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性β-內(nèi)酰胺環(huán)是青霉素族結(jié)構(gòu)最不穩(wěn)定的地方，如與酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子（銅、鉛、汞和銀）等作用時，易發(fā)生水解和分子重排，導致β-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞而失去活性。

　　鑒別試驗：

　　（1）鉀、鈉鹽的火焰反應

　?。?）呈色反應①羥肟酸鐵反應：青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子呈色。

　　頭孢哌酮：紅棕色；氨芐西林：紫紅色；頭孢氨芐：紅褐～褐色；頭孢噻吩鈉：紅褐色；普魯卡因青霉素：紫紅色；頭孢唑啉鈉：紅棕色。

　?、诹蛩帷跛岢噬磻侯^孢菌素能與硫酸—硝酸反應后成色。

　　頭孢噻吩鈉：紅棕色；頭孢氨芐：黃色；頭孢噻肟鈉：亮黃色。

　　③茚三酮反應：某些具有α-氨基的本類藥物（如氨芐西林）遇茚三酮即顯藍紫色。

　?、芘c斐林試劑反應：本類藥物具有類似肽鍵結(jié)構(gòu)，可產(chǎn)生雙縮脲反應。開環(huán)分解，使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。

　?、葑兩帷蛩岢噬磻喊⒛髁旨幼兩?硫酸實際混合后，于150℃加熱2～3min，因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。

　　⑥與重氮苯磺酸呈色反應：頭孢菌素族7位側(cè)鏈含有酚羥基基團時，能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應，顯橙黃色。

　?、吲c銅鹽呈色：頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后，生成銅配位鹽，顯橄欖綠色。

　?。?）沉淀反應

　?、僭谙∷嶂猩砂咨恋恚呵嗝顾剽浐颓嗝顾剽c加水溶解后，加稀鹽酸2滴，即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸中成鹽。

　?、谟袡C胺鹽的特殊反應重氮化-偶合反應：普魯卡因青霉素水溶液酸化后，顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反應，生成偶氮染料紅色沉淀。

　　與三硝基苯酚的反應：芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的殘渣含有二芐基乙二胺，加稀乙醇使殘渣溶解，加三硝基苯酚的飽和溶液，加熱后放冷，即析出二芐基乙二胺苦味酸結(jié)晶。

　?。?）光譜法①紫外分光光度法最大吸收波長鑒定法水解產(chǎn)物的最大吸收波長鑒定法②紅外吸收光譜③核磁共振光譜⑸色譜法① 薄層色譜法② 高效液相色譜法含量測定

　?。?）碘量法（芐星青霉素）

　　青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，其降解產(chǎn)物消耗碘。

　　反應分兩步進行：第一步反應是按化學計算量進行；第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應受溫度、pH、時間等諸多因素影響，故耗碘量沒有固定的量關系。因此試驗過程中要嚴格控制溫度，同時采用與青霉素標準品平行對照測定，則可抵消上述可變因素的影響。

　　碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，溫度在24～26℃為最好。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘，故本法的靈敏度較高。

　　注意：在滴定終點時放慢滴定速度，并強力振搖；如果滴定至終點又返現(xiàn)藍色，說明真正的終點尚未到達。醫(yī)學教育網(wǎng)mississippidebtrecovery.com

　?。?）汞量法（青霉素鈉、青霉素鉀）

　　青霉素分子不與汞鹽反應，而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應，根據(jù)消耗的汞鹽量可以計算青霉素的含量。

　　電位滴定法：指示電極：鉑電極；參比電極：汞-硫酸亞汞電極。滴定液：硝酸汞。

　　每1ml的硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg的總青霉素。

　　總青霉素的百分含量與降解產(chǎn)物的百分含量之差值即為青霉素的含量。

　　注意：青霉素含量計算以第二次滴定終點為依據(jù)；水解必須完全；空白試驗也要稱取供試品，但不經(jīng)氫氧化鈉水解；與碘量法比較，汞量法測定青霉素的主要優(yōu)點是不需要青霉素標準品作對照，汞鹽滴定液用EDTA標定即可。

　?。?）酸堿滴定法（苯唑西林鈉）

　?。?）紫外-可見分光光度法

　　（5）高效液相色譜法氨基糖苷類抗生素