系統(tǒng)性紅斑狼瘡的實驗室檢查需檢查什么?
關(guān)于“ 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的實驗室檢查需檢查什么?”的問題,相信很多 的考生都在關(guān)注,為方便大家了解,在此醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編為大家整理如下內(nèi)容:
與診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡有關(guān)的免疫學(xué)檢查
LE細(xì)胞
Hargraves(1948)首先在骨髓中發(fā)現(xiàn),Haserick(1949)從外周血中找到LE細(xì)胞。miecher(1954)證明紅斑狼瘡細(xì)胞因子為一種抗核因子,是一種γ球蛋白,現(xiàn)已明確形成LE細(xì)胞需要4個因素:①LE細(xì)胞因子,是一種抗核蛋白抗體,存在于外周血、骨髓、心包、胸腔和腹腔積液、皰液和腦脊液中,其相應(yīng)抗原為脫氧核糖核酸一組蛋白復(fù)合物,此抗原存在于細(xì)胞核內(nèi);②受損傷或死亡的細(xì)胞核,無種屬和+器官特異性,即人或動物的各種器官的細(xì)胞核均可與LE細(xì)胞因子起作用;③活躍的吞噬細(xì)胞,一般為中性粒細(xì)胞;④補體:在吞噬時需要補體的參與。LE細(xì)胞形成的過程首先為LE細(xì)胞因子與受損傷或死亡的細(xì)胞核起作用,使細(xì)胞核脹大,失去其染色質(zhì)結(jié)構(gòu),核膜溶解,變成均勻無結(jié)構(gòu)物質(zhì),所謂“勻圓體”細(xì)胞膜破裂,勻圓體墮入血液,許多吞噬細(xì)胞聚合來吞噬此變性的核,形態(tài)花瓣形細(xì)胞簇,隨后此變性核被一個吞噬細(xì)胞所吞噬,就形成所謂LE細(xì)胞,補體參與起促進(jìn)吞噬作用
約90%——70%活動性系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者,LE細(xì)胞檢查陽性。其他疾病如硬皮病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等中約10%病例可查見該細(xì)胞,此外,慢性活動性肝炎、藥疹如普魯卡因酰胺及肼酞嗪(肼苯噠嗪)等引起也可陽性。
雖然活動性系統(tǒng)性紅斑狼瘡血中可出現(xiàn)LE細(xì)胞,但由于在檢測時受多種因素的影響,實際檢出率并不高。但在無條件檢測自身抗體時仍可繼續(xù)此細(xì)胞的檢測。
抗核抗體試驗(ANA)
ANA是針對自身各種細(xì)胞核成分產(chǎn)生相應(yīng)抗體的總稱。本試驗敏感性高,特異性較差,現(xiàn)象作為篩選性試驗,一般采用間接免疫熒光法檢測血清ANA,以鼠肝印片作底物,亦有采用Will-2細(xì)胞,Hep-2細(xì)胞等作底物,約80%——95%病便ANA試驗陽性,尤以活動期為高,反復(fù)測定累積陽性率更高。血清ANA效價≥1:80,意義較大,效價變化基本上與臨床病情活動度相一致。熒光核型可見周邊型、均質(zhì)型和斑點型,偶見核仁型。另有5%——10%病例,臨床癥狀符合系統(tǒng)性紅斑狼瘡,但ANA持續(xù)陰性,有其它免疫學(xué)特征,可能是一個亞型。根據(jù)已在臨床上運用的免疫熒光(IF)、對流免疫電泳(CIE)和免疫印跡(IBT)等方法,在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中可檢出十余種ANA。常規(guī)用于臨床診斷的有:
IFANA:在熒光下ANA可被分為4型:均質(zhì)型、斑點型、膜型及核仁型。前3型常在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中出現(xiàn),其滴度≥1∶64時有診斷意義。IFANA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡所有的免疫學(xué)檢查中敏感性最高,陽性率可達(dá)90%以上,但特異性較差,其他CTD和疾病甚至正常人中均可出現(xiàn)陽性,但系統(tǒng)性紅斑狼瘡的滴度特別高,可作為診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡的重要指標(biāo)。
抗DNA抗體:該抗體分為天然(雙鏈)DNA(ds-DNA)和變性(單鏈)DNA(ss-DNA)。以綠蠅短膜蟲(Crithidia luciliae)或馬疫錐蟲(Trypanosoma equiperdum)或伊氏椎蟲(Trypanossma evansi)作底物,采用間接免疫熒光法檢測抗ds-DNA抗體,在系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期其陽性率可高達(dá)93%——100%。然而放射免疫法檢測其陽性率為60%——70%,抗ds-DNA抗體熒光核型顯示周邊型最具特異性,提示患者常有腎損害、預(yù)后差。在緩解期,其陽性率下降以至陰轉(zhuǎn),終末期患者亦可陰性??箂s-DNA抗體特異性差,除系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)庠谄渌麖浡越Y(jié)締組織疾病中亦可見到。有學(xué)者對51例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和660例其他自身免疫病的抗ds-DNA抗體進(jìn)行檢測,結(jié)果50/51的系統(tǒng)性紅斑狼瘡有抗ds-DNA抗體,而其他自身免疫病中1/660陽性,顯示抗ds-DNA抗體有很高的特異性,是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的“標(biāo)記抗體”,較高滴度的ds-DNA抗體可視為診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡的依據(jù)。而ss-DNA抗體缺乏特異性,對診斷無意義。有資料顯示抗ds-DNA抗體與腎臟、心臟受累和腎小球瘢痕形成密切相關(guān),而與中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)和肌肉骨骼的受累無關(guān),但也有資料和實驗顯示并非如此,有抗ds-DNA抗體者腎臟等臟器損害并非很嚴(yán)重。檢測ds-DNA抗體的方法有多種,但穩(wěn)定、能重復(fù)的僅有放射免疫分析(RIA)法,又稱Farr法。
抗ENA(可提取性核抗原)抗體
抗原從小牛胸腺或兔胸腺中撮,采用瓊脂擴散法或?qū)α髅庖唠娪緳z測,近年亦有用免疫印跡法檢測的,抗ENA抗體中主要包括抗Sm和nRNP等七種抗體,mRNP或U1RNP抗原為七種分子量不同的蛋白質(zhì)(12-68KD)與U1RNA(U為尿嘧啶核苷酸)結(jié)合的復(fù)合物;而Sm為同樣七種蛋白質(zhì)與U2、U1、U4、U5、U6RNA所形成的復(fù)合物;抗Sm抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的陽性率為20%——25%,為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的標(biāo)記性抗體,常和抗ds-DNA抗體伴隨出現(xiàn),與疾病活動性無關(guān),可作為回溯性診斷的參考指標(biāo);抗U1RNP抗體可在多種結(jié)締組織病中出現(xiàn),其高效價除發(fā)生在系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)?,常是診斷混合結(jié)締組織病的重要血清學(xué)依據(jù)。ENA抗體中與系統(tǒng)性紅斑狼瘡關(guān)系密切的有以下4種:
A.抗Sm抗體:Sm抗原中的主要蛋白組分有SmB/B'(28kD、29kD)和SmD(13.5kD),其中抗SmD抗體最有特異性,而SmB/B'在抗原序列上與RNP(核糖核蛋白)相近似,抗RNP抗體在混合性結(jié)締組織?。∕CTD)中陽性率最高。免疫印跡(IBT)法檢測抗Sm抗體時13.5kD總是與28kD、29kD伴隨,而28kD、29kD抗體可單獨出現(xiàn)。只有13.5kD與28kD、29kD同時出現(xiàn)時才能確定“抗Sm抗體陽性”??筍m抗體是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的“標(biāo)記抗體”,僅在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中能檢測到,有很高的特異性,但僅有不到1/3的患者出現(xiàn)此抗體。較早的研究認(rèn)為單獨出現(xiàn)Sm抗體腎臟與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害要比dsDNA抗體輕。20世紀(jì)90年代后期對Sm抗體的研究觀察到抗Sm(抗SmB/B')、抗ds-DNA抗體與抗心磷脂抗抗體(ACL)有一定的相關(guān)性,即在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中ACL抗體陽性者伴有抗Sm和抗dsDNA抗體的比率要顯著高于抗ACL陰性者??筍m抗體與光敏感有關(guān),抗Sm陽性的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者皮膚最小紅斑量要明顯低于抗Sm陰性者。還有研究發(fā)現(xiàn)抗SmD(抗SmD183-119)抗體與疾病活動相關(guān),急性發(fā)病、伴有關(guān)節(jié)炎、蝶形紅斑、嗜睡、漿膜炎和腎炎者其抗Sm抗體滴度特別高,抗體滴度隨癥狀好轉(zhuǎn)而下降。
B.抗核糖核蛋白(RNP)抗體:RNP抗原的主要蛋白組分為U1-70kD、U1-A(32kD)及U1-C(17.5kD)。IBT法檢測時29kD、28kD可伴隨以上條帶同時出現(xiàn);如果IBT法檢測單獨出現(xiàn)29kD、28kD時不能簡單確定為“抗Sm抗體”或“抗RNP抗體”,應(yīng)根據(jù)CIE的電泳結(jié)果。因此,對各種ENA抗體的檢測不應(yīng)僅用一種方法,而應(yīng)采用IBT與CIE兩種方法。抗RNP抗體出現(xiàn)在30%以上的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中。該抗體出現(xiàn)一般預(yù)示預(yù)后較好,腎損害輕。
C.抗Ro(SS-A)和抗La(SS-B)抗體:通常采用對流免疫電泳法檢測,近亦可用免疫印跡法測定。用前法檢測抗Ro/SS-A抗體陽性率為30%——39%,抗La/SS-B為13%;兩種抗體對原發(fā)性干燥綜合征和系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并干燥綜合征以及亞急性皮膚型紅斑狼瘡呈高陽性率和重要參考價值??筊o/SS-A抗體是新生兒紅斑狼瘡的重要血清學(xué)標(biāo)記 ,與光敏感相關(guān)??筊o/La抗體更多出現(xiàn)于亞急性皮膚型紅斑狼瘡(亞急性皮膚型紅斑狼瘡)、干燥綜合征(SS)和新生兒紅斑狼瘡(NLE)以及先天性房室傳導(dǎo)阻滯中。Ro蛋白抗原有60kD和52kD 2種,60kD的抗體在亞急性皮膚型紅斑狼瘡中多見,52kD的抗體多出現(xiàn)于SS中。La蛋白抗原主要是48kD。此兩種抗體(或1種)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中出現(xiàn)時多伴有SS。在臨床上觀察到凡是抗Ro或La抗體陽性的系統(tǒng)性紅斑狼瘡其預(yù)后較好;也有報道ANA與抗Ro抗體同時出現(xiàn)易合并血管炎和腎炎,而ANA與抗La抗體、抗RNP抗體同時出現(xiàn)時則臨床癥狀輕微。
皮膚狼瘡帶試驗(LBT)
應(yīng)用直接免疫熒光抗體技術(shù)檢測皮膚免疫熒光帶或狼瘡帶,即用直接免疫熒光(DIF)在真皮表皮連接處見到Ig和補體的帶狀沉積,主要為IgG,其次為IgM、IgA。LBT皮損處陽性率在急性皮膚型紅斑狼瘡、亞急性皮膚型紅斑狼瘡和盤狀紅斑狼瘡均為90%左右,但正常皮膚系統(tǒng)性紅斑狼瘡的陽性率為50%——70%,而盤狀紅斑狼瘡為陰性。如盤狀紅斑狼瘡的正常皮膚LBT為陽性,則提示可轉(zhuǎn)化為系統(tǒng)性紅斑狼瘡。一般于前臂伸側(cè)或屈側(cè)正常皮膚處取材,前者陽性率高,后者陽性率低,但因伸側(cè)與陽光接觸,有時會有假陽性。如于臀部等皮膚非暴露部位取材其陽性率最低,但對系統(tǒng)性紅斑狼瘡最有診斷價值。對那些臨床和實驗室表現(xiàn)都不特異的病例,非皮損處LBT陽性是一個非常有用的診斷信息。
曾凡飲等采用1M.Nacl分離人皮膚DIF法對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者進(jìn)行狼瘡帶的研究,發(fā)現(xiàn)本法的陽性率達(dá)90.9%,以Ig沉積于真皮側(cè)最為常見,其次為沉積于真表皮兩側(cè),而未見單純于表皮側(cè)的病例,熒光形態(tài)以線狀多見,少數(shù)為顆粒太。近來張學(xué)軍等采用熱分離表皮真皮法在5例大皰性系統(tǒng)性紅斑狼瘡中有3例血管結(jié)合在真皮側(cè),另2例與真皮側(cè),表示出抗體異質(zhì)性。
與判斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡病情有關(guān)的實驗檢查
以下實驗檢查僅有助于判斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡是否活動,了解臟器損害程度,無助于診斷。
血沉:增快,在活動時可>100mm/h,是判斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動與否的重要指標(biāo)。如在系統(tǒng)性紅斑狼瘡治療過程中出現(xiàn)血沉又復(fù)增快時需與感染區(qū)別。
血清蛋白:白蛋白降低,在有嚴(yán)重腎損害時可很低;γ和α2球蛋白升高,纖維蛋白原、冷球蛋白和冷凝集素均可增高;IgG、IgM、IgA及IgE在活動期時可有不同程度的升高,尤其是IgG最為顯著。
血清補體:總補體和C1、C3、C4、C2及C9在活動時降低,有時下降程度與病情相一致,尤其是在有腎損害時。但有些先天性補體缺陷的患者易患系統(tǒng)性紅斑狼瘡,其特點是皮膚損害重而腎損害輕。
循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC):CIC在活動時升高。由于影響CIC檢測結(jié)果的因素較多,而目前大都采用聚乙二醇(PEG)沉淀法,其結(jié)果不穩(wěn)定,所以對系統(tǒng)性紅斑狼瘡病情判斷的意義不大。
類風(fēng)濕因子(RF):約1/3以上的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者可陽性,但滴度不高。RF滴度的高低是系統(tǒng)性紅斑狼瘡與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎在實驗診斷上的重要區(qū)別之一。
細(xì)胞免疫功能測定:淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(PHA-LTT)、舊結(jié)核菌素(OT)、鏈球菌脫氧核糖核酸酶和鏈激酶(SD-SK)皮試往往陰性。
T細(xì)胞亞群檢測:采用單克隆抗體熒光技術(shù)示活動性病例中總T細(xì)胞(CD3)和抑制性T淋巴細(xì)胞(CD8)明顯降低,輔助性T細(xì)胞(CD4)/抑制性T細(xì)胞(CD4)(CD8)比值增高,隨著治療病情穩(wěn)定,T抑制細(xì)胞恢復(fù)正常,T輔助細(xì)胞降低,兩者比值恢復(fù)或低于正常。
自然殺傷細(xì)胞(NK):采用酶(LDH)釋放法檢測NK活性結(jié)果示活性顯著降低,在活動期更為顯著。
皮膚試驗:采用自身或同種的白細(xì)胞進(jìn)行皮試,75%系統(tǒng)性紅斑狼瘡病例陽性。采用小牛胸中核蛋白作皮試,84%(21/25)陽性。采用小牛胸腺中脫氧核糖核酸作皮試,48%(12/25)陽性。采用小牛胸腺中組蛋白作皮試,92%(23/25)陽性。
毛細(xì)血管鏡檢查:于系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者手指甲皺和舌尖微循環(huán)中可見多樣形成的障礙,表現(xiàn)為:①微血管袢增多,微血管張力較差,微血管擴張尤以靜脈管擴張較突出,甚至有巨血管出現(xiàn);②微血流障礙,如血色暗紅,微血管袢頂瘀血,袢內(nèi)血細(xì)胞聚集、流速減慢或瘀滯;③微血管周圍有滲出和出血。
這些微循環(huán)障礙導(dǎo)致血流瘀滯和血細(xì)胞聚集異形微血管、巨形微血管和擴張膨大微血管,皆可形成微血管周圍的滲出和出血,同時又可進(jìn)一步發(fā)展形成血流的泥化,甚至有微血栓產(chǎn)生,造成惡性循環(huán)。
血液流變學(xué)測定:呈顯著異常,如全血比粘度、全血還原粘度,血漿粘度增加,這些提示血粘度的增加,血液流動性的下降;紅細(xì)胞電泳時間延長,血沉快,K值增大,一致表明紅細(xì)胞聚集性的增加,但血細(xì)胞壓積普通稍低(貧血);血中纖維蛋白原增高,血液粘聚性增加,導(dǎo)致血流緩慢,為活血化瘀中醫(yī)治療提供理論基礎(chǔ)。
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