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液體內(nèi)沉淀試驗:絮狀沉淀試驗

2017-06-02 16:48 來源:
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絮狀沉淀試驗為歷史較久,又較有用的方法。該法要點(diǎn)是:將抗原與抗體溶液混合在一起,在電解質(zhì)存在下,抗原與抗體結(jié)合,形成絮狀沉淀物。醫(yī)學(xué)教/育網(wǎng)搜集整理這種沉淀試驗受到抗原和抗體比例的直接影響,因而產(chǎn)生了兩種最適比例的基本測定方法。

(一)抗原稀釋法

抗原稀釋法(Dean-Webb法)是將可溶性抗原作一系列稀釋,與恒定濃度的抗血清等量混合,置室溫或37℃反應(yīng)后,產(chǎn)生的沉淀物隨抗原的變化而不同。以牛血清白蛋白為例的實(shí)驗結(jié)果。

Dean-Webb定量沉淀試驗

管號 抗原 抗體 總沉淀量 反應(yīng)過剩物 抗原沉淀量 抗體沉淀量 沉淀中Ab/Ag
1 0.003 0.68 0.093 Ab 0.003 0.090 30.0
2 0.005 0.68 0.145 Ab 0.005 0.140 28.0
3 0.011 0.68 0.249 Ab 0.011 0.238 21.7
4 0.021 0.68 0.422 Ab 0.021 0.401 19.1
5 0.032 0.68 0.571 Ab 0.032 0.539 16.8
6 0.043 0.68 0.734 0.043 0.691 16.1
7 0.064 0.68 0.720 Ab
8 0.085 0.68 0.601 Ag
9 0.171 0.68 0.464 Ag
10 0.341 0.68 0.368 Ag

(二)抗體稀釋法(Ramon法)

本法采用恒定的抗原量與不同程度稀釋的抗體反應(yīng),計算結(jié)果同上法,得出的是抗體結(jié)合價和最適比。

方陣最適比測定

抗體稀釋度 抗原稀釋度
1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/12 對照  
1/5 ++ +++ +++ ++ ±
1/10 ++ ++ ++ +++ ++
1/20 ++ ++ +++ ++
1/40 ± ++ +++ ++
1/80

"+"為沉淀物量:為最適比

現(xiàn)今,為了取得抗原與抗體的最佳比例,已將以上兩法相結(jié)合,即抗原和抗體同時稀釋,稱為棋盤格法(亦稱方陣法),找出最佳配比。

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