層析法的分類(lèi)都有哪些?
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1.凝膠層析
又稱(chēng)分子篩過(guò)濾或排阻層析等。
固定相是多孔凝膠,各組分的分子大小不同,因而在凝膠上受阻滯的程度(移動(dòng)速度)也不同。
優(yōu)點(diǎn):所用凝膠屬于惰性載體,吸附力弱,操作條件溫和,不需要有機(jī)溶劑,對(duì)高分子物質(zhì)有很好的分離效果。
常用的凝膠有Sephadex G(葡聚糖凝膠)系列。
凝膠層析可用于脫鹽、分離提純、測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量、高分子溶液的濃縮等。
2.離子交換層析
采用具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相,利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆交換的性質(zhì)來(lái)分離離子型化合物的方法。
主要用于分離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì),也可用于分離核酸、核苷酸及其他帶電荷的生物分子。
3.高效液相層析
在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上,引進(jìn)氣相層析的理論而發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新穎快速的分離技術(shù)。
具有分離能力強(qiáng)、測(cè)定靈敏度高、可在室溫下進(jìn)行、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn),對(duì)分離蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、生物堿、類(lèi)固醇和類(lèi)脂等尤其有利。
根據(jù)流動(dòng)相和固定相相對(duì)極性,高效液相色譜分析可分為正相和反相兩種。
4.親和層析
利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力,從而達(dá)到分離的目的。
將可親和的一對(duì)分子中的一方以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑,當(dāng)含混合組分的樣品通過(guò)此固定相時(shí),只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)才能被固定相吸附結(jié)合,無(wú)關(guān)組分隨流動(dòng)相流出。
親和層析中所用的載體稱(chēng)為基質(zhì),與基質(zhì)共價(jià)連接的化合物稱(chēng)配基。
具有專(zhuān)一親和力的生物分子對(duì)主要有:
抗原與抗體,DNA與互補(bǔ)DNA或RNA,酶與底物,激素與受體,維生素與特異結(jié)合蛋白,糖蛋白與植物凝集素等。
親和層析可用于純化生物大分子、稀釋液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏、分離核酸等。
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