巨噬細胞溶酶體酶的測定:
巨噬細胞富含溶酶體酶,如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、溶菌酶等,測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標(biāo)之一。
(1)硝酸鉛法:本法優(yōu)點是用普通試劑醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)|搜集整理,價格便宜,一般實驗室均有條件做,封片后可較長時間保存,并可用電子顯微鏡研究觀察細胞的超微結(jié)構(gòu)。缺點是細胞必需固定,而且固定條件要求嚴(yán)格,如處理不當(dāng)酶活性易消失,反應(yīng)步驟也較多。
該法基本原理是在適當(dāng)?shù)拿感詶l件下,巨噬細胞內(nèi)的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后,后者與硝酸鉛反應(yīng)產(chǎn)生磷酸鉛,而磷酸鉛再與硫酸銨反應(yīng)則形成黑色硫化鉛,沉積在胞漿內(nèi)酸所在處,顯示棕黑色顆粒。酶活性強弱可根據(jù)顆粒的數(shù)量和粗細不同而分級判斷,顆粒數(shù)量少則細的為+,顆粒多而粗的為++,顆粒很多且很粗的為+++.
(2)偶氮法:本法操作簡便,反應(yīng)液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后,形成萘酚和磷酸鹽,而萘酚結(jié)構(gòu)中的羥基(-OH)鄰近的活潑碳原子,立即與偶氮染料起反應(yīng),而產(chǎn)生鮮艷的棕色沉積在酶所在處,缺點是封片后保存時間短。