精子與卵結(jié)合除精子濃度和數(shù)量因素外,還必須具備妝好的運(yùn)動(dòng)功能和對(duì)宮頸粘液、卵細(xì)胞放射冠、透明帶及卵細(xì)胞膜的穿透力。精子穿透力是評(píng)價(jià)精子功能的主要指標(biāo)之一,據(jù)報(bào)告,約18%精液常規(guī)檢查正常的精子不能穿透宮頸粘液,所以檢查精子功能對(duì)研究精子在體內(nèi)運(yùn)行,受精能力發(fā)及男性不育的原因有重要價(jià)值,其常用的試驗(yàn)有:
1、體內(nèi)穿透試驗(yàn):(in vivo penetration test)又稱性交后試驗(yàn)。檢查于排卵期性交后一定時(shí)間內(nèi)宮頸中粘液活精子數(shù)量,存活率及活運(yùn)動(dòng)力,以評(píng)價(jià)精子對(duì)宮頸粘液的穿透能力,正常人可見(jiàn)>50個(gè)HPF有正常活動(dòng)能力的精子。當(dāng)宮頸粘液異常或有抗精子抗體時(shí),精子體內(nèi)穿透能力減弱或喪失。其結(jié)果還受雌激素分泌狀況等多種因素影響。
2、體外穿透試驗(yàn)(in vitro,penetration test)
(1)簡(jiǎn)化玻片試驗(yàn):將一滴宮頸粘液置載正玻片上,用蓋玻片鋪平,兩片之間的厚度用哇化的玻璃珠控制,在載玻片兩側(cè)各滴一滴精液,使懷蓋玻片邊緣接觸,借毛細(xì)作用將精液移向蓋玻片,使宮頸粘液與精液之間現(xiàn)一清晰接觸界面,37攝氏度卵育30分鐘。精子在接觸界面處形成一指狀突起伸入粘液,精子穿過(guò)指狀突起進(jìn)入精液,然后呈扇形散開運(yùn)動(dòng)。本試驗(yàn)的觀察指標(biāo)為:①粗精了子穿透并有90%以上具有明確直線運(yùn)動(dòng)的活動(dòng)精子時(shí)為正常結(jié)果;②精子穿透粘液,但離開粘液與沮液接觸面<500μm為較差;③精子穿透粘液,但很快失活或僅作擺動(dòng)力為異常;④精子未穿透與精液的接觸界面,精子接觸界面的精液側(cè)凝集為異常結(jié)果。
本試驗(yàn)常帶來(lái)有一定的主觀性,因?yàn)樵谄矫娌A鲜咕赫骋河|界面的大小和形狀完全標(biāo)準(zhǔn)化是不可能和,因?yàn)槎芏ㄐ栽u(píng)價(jià)精子粘液的相互作用。
(2)精子宮頸粘液接觸(sperm-cervical mucus contact,SCMC)試驗(yàn):本試驗(yàn)的目的是檢驗(yàn)精液和燥頸內(nèi)是否存在損害精子運(yùn)動(dòng)功能的ASAB及其損害程度,精子與近排卵期的宮頸粘液等量混合,富強(qiáng)溫下作用30min,鏡下計(jì)數(shù)擺動(dòng)的精子,求出擺動(dòng)精子的出現(xiàn)率(%),以單獨(dú)的精液滴鏡檢作為精子活力的對(duì)照,擺動(dòng)精子的出現(xiàn)率越高,意味著精子不能穿過(guò)宮頸粘液。說(shuō)吸ASAB對(duì)精子運(yùn)動(dòng)功能的損害越重,見(jiàn)表11-1.
表11-1 ASAB對(duì)精子運(yùn)動(dòng)功能損害
SCMC實(shí)訓(xùn)結(jié)果 | 擺動(dòng)精子(%) | 精子運(yùn)動(dòng)功能受損 |
陰性 | 0-25 | 無(wú) |
弱陽(yáng)性 | 26-50 | 輕微(可疑) |
陽(yáng)性 | 51-75 | 明顯 |
強(qiáng)陽(yáng)性 | 76-100 | 嚴(yán)重 |
玻片試驗(yàn)與SCMC試驗(yàn)陽(yáng)性者可用其它供者的精液或燥頸粘液分別進(jìn)行交叉試驗(yàn),以利于判斷ASAB的來(lái)源是清液或燥頸粘液。
(3)無(wú)透明帶倉(cāng)鼠卵-精子穿透試驗(yàn)(Zone free hamstar egg sperm penetration test,ZFHESPT)簡(jiǎn)稱精子倉(cāng)鼠卵穿透試驗(yàn)是一種極為嚴(yán)格的生物學(xué)試驗(yàn),技術(shù)復(fù)雜,影響因素多。若能加強(qiáng)質(zhì)量控制,再加上其它客觀檢查如精子活力等,可作為測(cè)定功能和基礎(chǔ)。
其方法將精子于BWW培養(yǎng)液中經(jīng)37攝氏度獲能,再與用胰蛋白酶外理去除透明帶的倉(cāng)鼠混合繼續(xù)孵育完成受精過(guò)種程。然后以相差顯微鏡檢查,計(jì)數(shù)卵子受精率和受精指數(shù)。
受精率(%)=受精卵數(shù)/卵細(xì)胞總數(shù)×100%
由于卵細(xì)胞已去除透明帶一個(gè)卵細(xì)胞可被多個(gè)精子穿透。FI為穿透卵細(xì)胞的精子總數(shù)與卵細(xì)胞總數(shù)之比,從整體上反映精子穿透力與項(xiàng)體反應(yīng)。FI越高說(shuō)明精子受精能力越強(qiáng)。
- · 精子功能的檢查