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麻疹病毒IgM抗體檢測標準操作過程

2012-04-09 15:11 來源:
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[前言]

麻疹是由麻疹病毒引起的急性呼吸道傳染病。好發(fā)于冬春季,6個月至5歲兒童發(fā)病率最高,近年來由于疫苗免疫的結果,麻疹流行強度減弱,發(fā)病年齡后移。病毒可通過空氣飛沫傳播。易感者接觸麻疹病毒,90%發(fā)病,所以傳染性強,。病人是唯一的傳染源。自出疹前2天至出疹后5天,傳染性最強。任何人都容易感染,尤其兒童最多見,隱性感染率低。病毒先侵入眼、呼吸道,并在局部粘膜增殖,少量入血。然后隨血流侵入全身淋巴組織和單核吞噬系統(tǒng),并在其內(nèi)大量增殖,再次入血,即第二次病情血癥,出現(xiàn)高熱和出疹,病毒血癥持續(xù)至出疹后第2天。全身性遲發(fā)型超敏性細胞免疫反應。免疫性損害造成組織壞死和炎性反應??梢娖ふ?,由于真皮腫脹,增生皮疹鼓出,突出于皮面,為充血性的。有單核細胞炎癥浸潤,紅細胞崩解,血漿滲出。所以皮疹有色素沉著,表皮細胞壞死、脫屑。還可見柯氏斑,是粘膜下的細胞變性,壞死,多核巨細胞變引起的,呈白點狀。病毒侵襲任何組織時均出現(xiàn)多核巨細胞。呼吸道病變最嚴重,可并發(fā)麻疹腦炎。麻疹病毒可干擾人體非特異性免疫力,干擾被結核菌素致敏的淋巴細胞敏感性,但極易繼發(fā)細菌感染。麻疹的潛伏期6—18天,發(fā)病突然。

[原理]

本試劑盒先用吸收液去除IgG,再檢測人血清或血漿中的抗-HSV-Ⅱ?IgM,消除假陰性。具有簡便、快速等優(yōu)點。

[試劑廠家]

深圳市綠瀚生物技術有限公司[試劑盒組成] 1、包被板條2、定標液3、陰陽對照血清4、酶結合物5、底物6、顯色液7,終止液8,洗滌液9,吸收液[試劑的穩(wěn)定性與貯存]試劑自生產(chǎn)日起避光貯存于2-8℃,有效期內(nèi)穩(wěn)定。

[標本的收集與處理]

標本為無溶血血清。

[操作步驟]

1,樣本稀釋:用血清稀釋液1:41稀釋定標液、質控、血清,取稀釋定標液、質控、血清150ul于另一管中,加吸收液150ul,徹底混勻,室溫(21-25℃)靜置20+/-5分鐘。

2,加樣:取包被板,加入吸收稀釋定標液、質控、血清樣本各100ul.并設空白對照一孔,室溫(21-25℃)靜置20+/-2分鐘。甩去,加洗滌液一滴,蒸餾水洗滌5次,拍干。

3,反應:加酶結合物100ul,室溫(21-25℃)靜置20+/-2分鐘。甩去,每孔加洗滌液一滴,蒸餾水洗滌5次,拍干。

4,顯色:每孔加底物和顯色液各100ul,室溫(21-25℃)靜置10+/-2分鐘。以陽性對照出現(xiàn)明顯藍色為準。

[結果判定]

1、目測法:在白色背景下觀察各孔顏色,明顯蘭色為陽性,無色或極淡蘭色為陰性。

2、酶標儀檢測(選擇波長450nm):每孔加終止液一滴,用空白孔校零,測定各孔OD值。

臨界值(C.O.)=2.1×陰性對照OD值

(1)樣本OD值S/C.O.≥1.0判為陽性;

(2)樣本OD值S/C.O.<0.9判為陰性。

(3)樣本OD值S/C.O.介于0.9與1.0之間,判為可疑,需重復檢測。

注:(1)當陽性對照/陰性對照OD值≥5時,試驗結果有效;(2)陰性對照OD值小于0.05時,按0.05計算;大于0.05時,按實際值計算。

[質量控制]為確保測試結果準確可靠,每批測試均應放置陰陽性質控血清與被檢樣品同時測試,用以檢查試劑性能。

[注意事項]

1、不同批號的試劑不可混用。

2、試劑盒用前先平衡至室溫。含血球的標本易出現(xiàn)假陽性,應避免使用。

3、未用完的板條應及時封存于易封袋中。

4、滴加試劑前,應將滴瓶翻轉數(shù)次混勻。滴加時瓶身應保持垂直。

5、試劑盒置于2-8℃貯存,有效期6個月6、本試劑應視為有傳染性物質,請按傳染病實驗室規(guī)程操作。

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