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影響電泳的主要因素-生化檢驗(yàn)

2012-10-29 17:16 來(lái)源:
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1.電場(chǎng)強(qiáng)度 電場(chǎng)強(qiáng)度也稱(chēng)電位梯度,它是指單位長(zhǎng)度的電位降。電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)電泳起重要的作用。電場(chǎng)強(qiáng)度愈大,則帶電粒子的移動(dòng)愈快。根據(jù)所用電場(chǎng)強(qiáng)度大小,可將電泳分為常壓電泳(100~500V)和高壓電泳(500~10000V)。常壓電泳分離時(shí)間長(zhǎng),多用于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì);高壓電泳分離時(shí)間短,多用來(lái)分離氨基酸、多肽、核酸等小分子物質(zhì)。

2.溶液的pH值 溶液的pH值決定了物質(zhì)的解離程度,也決定了帶電粒子所帶的凈電荷。溶液的pH值離等電點(diǎn)愈遠(yuǎn),則粒子所帶的電荷愈多,電泳速度愈快。在分離某一蛋白質(zhì)混合物時(shí),應(yīng)選擇適宜pH值,以利于各蛋白質(zhì)組分的分離。為了使溶液pH值在電泳過(guò)程中恒定,須使用緩沖溶液。

3.溶液離子強(qiáng)度 離子強(qiáng)度影響粒子的電動(dòng)電位(ξ電位),不宜過(guò)高或過(guò)低,醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理一般最適宜的離子強(qiáng)度在0.02~0.2mol/kg。

4.電滲 在電場(chǎng)作用下液體對(duì)固體支持物的相對(duì)移動(dòng)稱(chēng)為電滲。由于電滲現(xiàn)象往往與電泳同時(shí)存在,所以帶電粒子的移動(dòng)同時(shí)受電滲影響。如電泳方向與電滲相反,則實(shí)際電泳的距離等于電泳距離減去電滲的距離。在選擇支持物時(shí)應(yīng)注意盡量避免選用高電滲作用的物質(zhì)。

5.其它影響因素 緩沖液的粘度,緩沖液與帶點(diǎn)粒子的相互作用以及電泳時(shí)的溫度變化等因素也都影響電泳的速度。

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