方法名稱：

復方甘草片—嗎啡、罌栗果提取物和罌栗果提取物粉的測定—高效液相色譜法

應用范圍：

該方法采用高效液相色譜法測定復方甘草片中嗎啡、罌栗果提取物和罌栗果提取物粉的含量。

該方法適用于復方甘草片。

方法原理：

供試品經(jīng)固相萃取柱分離后，收集的部分進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長220nm處檢測嗎啡、罌栗果提取物和罌栗果提取物粉的吸收值，計算出其含量。

試劑：

1. 乙腈

2. 0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液

3. 0.0025mol/L庚烷磺酸鈉溶液

4. 甲醇

儀器設備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按嗎啡計算不低于1000。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 0.0025mol/L庚烷磺酸鈉溶液 乙腈=5 5 2

2.2 檢測波長：220nm

2.3 柱溫：室溫

3. 固相萃取柱：用十八烷基硅烷健合硅膠為填充物。

試樣制備：

1. 稱取供試品

嗎啡：取該品20片，精密稱定，研細，精密稱取約10片的量。

罌栗果提取物：取該品約10g，研成粗粉（過80目篩），精密稱取1g，置200mL量瓶中。

2. 對照品溶液的制備

嗎啡：精密稱取嗎啡對照品適量，用含有2%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL約含嗎啡0.01 mg的溶液。

罌栗果提取物：取嗎啡對照品適量，精密稱定，用含有10%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL約含嗎啡0.05 mg的溶液。

罌栗果提取物粉：精密稱取嗎啡、磷酸可待因對照品適量，用含有10%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL約含嗎啡0.05mg和磷酸可待因0.025mg的溶液。

3. 供試品溶液的制備

嗎啡：取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3：1）15mL與水5mL沖洗，再用pH值約為9的氨水溶液（取水適量，滴加氨試液至pH值為9）沖洗至流出液pH值約為9，待用。將上述供試品置磨口錐形瓶中超聲處理5分鐘，精密加稀鹽酸（6→10）10mL，搖勻，超聲處理20分鐘使嗎啡溶解，取出，放置室溫，濾過；精密量取續(xù)濾液1.0mL，至上述固相柱上，滴加氨試液適量使柱內(nèi)溶液的pH值約為9（上樣前另取同體積的續(xù)濾液預先調(diào)試，以確定滴加氨試液的量），搖勻，待溶劑滴盡后，用水20mL沖洗，用含2%甲醇的5%醋酸溶液洗脫，用5mL量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。

罌栗果提取物和罌栗果提取物粉：取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3：1）15mL與水5mL沖洗，再用pH值約為9的氨水溶液（取水適量，滴加氨試液至pH值為9）沖洗至流出液pH值約為9，待用。將上述供試品加5%醋酸溶液適量，超聲處理30分鐘使嗎啡溶解，取出，放置室溫，用5%醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液0.5mL，至上述固相柱上，滴加氨試液適量使柱內(nèi)溶液的pH值約為9（上樣前另取同體積的續(xù)濾液預先調(diào)試，以確定滴加氨試液的量），搖勻，待溶劑滴盡后，用水20mL沖洗，用含10%甲醇的5%醋酸溶液洗脫，用5mL量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長220nm處測定嗎啡的吸收值，計算出其含量。