方法名稱：

維生素B6的測(cè)定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定維生素B6（C8H10NO5P）的含量。

本方法適用于維生素B6。

方法原理：

供試品制成流動(dòng)相溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)291nm處檢測(cè)維生素B6吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑：

1. 甲醇

2. 0.04%戊烷磺酸鈉溶液（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）

3. 冰醋酸

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按維生素B6峰計(jì)算不低于4000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：0.04%戊烷磺酸鈉溶液 甲醇=85 15。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：291nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. 稱取供試品

精密稱取本品適量。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取維生素B6對(duì)照品適量，同供試品配制，搖勻，即得。

3. 供試品溶液的制備

將供試品加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1mL含有約0.1mg的溶液，搖勻，即得。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)291nm處測(cè)定維生素B6的吸收值，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)：

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.668。