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阿魏酸試驗研究

試驗中,阿魏酸在濃度為50~500 μmol/L之間對DNA都有保護作用,雖然各濃度組之間差異沒有顯著性,但是尾距有隨阿魏酸濃度增加而減小的趨勢。阿魏酸存在于眾多的中草藥中,如:當(dāng)歸、川芎、丹參、鼠尾草、咖啡豆等,眾多研究顯示它對預(yù)防和治療心血管疾病十分有效。以往雖然有不少關(guān)于阿魏酸的抗氧化活性的報道,但是本實驗時第一次使用彗星電泳法研究在細胞水平阿魏酸對DNA的保護作用,從本實驗中可以看出阿魏酸有較強的抗氧化保護DNA的作用。阿魏酸之所以有較強的抗氧化活性,是多種機制共同作用的結(jié)果。阿魏酸的自由基清除能力與其分子結(jié)構(gòu)密切相關(guān),自由基與阿魏酸相撞后,很容易從其上面奪取一個氫原子而形成苯氧自由基,由于未配對電子不僅可以存在于氧原子上,還可以存在于整個分子的任何部位,同時借助-OCH3可以形成p型弧對電子,因而阿魏酸形成的苯氧自由基相對穩(wěn)定,而且當(dāng)兩個苯氧自由基相撞時,可以結(jié)合形成姜黃素,從而減慢和終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的進程。有實驗顯示將p-香豆酸甲氧基化形成阿魏酸在一定程度上降低了苯氧自由基的穩(wěn)定性,因而抗氧化能力也有所降低。乙酰化阿魏酸可以明顯降低它的抗氧化能力,這些都證明了它是通過形成穩(wěn)定的苯氧自由基從而終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來實現(xiàn)抗氧化的。然而阿魏酸具有-CH=CHCOOH基團,具有吸電子作用,本不利于苯氧自由基的穩(wěn)定,但考慮到阿魏酸在溶液中顯酸性,因此一部分將以負離子形式存在,而-CH=CHCOO-具有強推電子性質(zhì),使其抗氧化活性增強。

實驗顯示各種濃度組的阿司匹林和水楊酸對DNA都有保護作用,各濃度組濃度與陽性對照之間都存在顯著差異,當(dāng)濃度為500 μmol/L時其尾距較低濃度組有所增加,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。可能與較高濃度時,它們產(chǎn)生較多的活性氧有關(guān)。這種效果與咖啡酸有些相似,可能產(chǎn)生的H2O2較少,所以損傷效果沒有那么明顯。實驗接著采取只用阿司匹林和水楊酸對細胞進行預(yù)處理,而不用H2O2作用的方法,彗星電泳后發(fā)現(xiàn)彗星尾距與陰性對照組相比沒有顯著變化。由于這是第一次利用彗星電泳法在細胞水平研究阿司匹林和水楊酸抗氧化保護DNA的作用,而且也沒有關(guān)于它們產(chǎn)生H2O2、的研究,所以其在高濃度時彗星尾距較低濃度組略有增加的具體機制還需要進一步研究。實驗顯示阿司匹林和水楊酸具有較強的抗氧化保護DNA的作用,長期以來二者一直作為消炎止痛藥而廣泛應(yīng)用于臨床,進來的研究主要集中于它們的抗氧化特性。據(jù)報道長時間的使用阿司匹林可以防止結(jié)腸癌和其他消化道腫瘤包括食管癌胃癌。已證明阿司匹林和水楊酸具有清除·OH自由基的作用,濃度為0.5~2 mmol/L的阿司匹林可以阻止H2O2、Cu2+和HQ、Cu2+誘導(dǎo)的DNA損傷,而對于H2O2 沒有清除作用。但是Qiao等[11]用彗星電泳法證明阿司匹林誘導(dǎo)HT-29細胞系凋亡時發(fā)現(xiàn):用 3 mmol/L阿司匹林作用72 h后,可以導(dǎo)致DNA的明顯斷裂損傷,此實驗結(jié)果可能與本實驗中阿司匹林和水楊酸高濃度組彗星尾距較低濃度組有所增加相關(guān)。

關(guān)于香草酸的研究非常少,但是其在結(jié)構(gòu)上與阿魏酸與咖啡酸在結(jié)構(gòu)上極其相似,而且它們?nèi)咧g又可以作為彼此的代謝物而存在于體內(nèi)。本實驗發(fā)現(xiàn)香草酸對DNA亦有保護作用,而且也有隨劑量增加而加強的趨勢,雖然統(tǒng)計學(xué)上各濃度組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。從結(jié)構(gòu)上來看,香草酸和阿魏酸與咖啡酸的不同之處,主要在于咖啡酸在鄰位存在一個-OH,僅能抑制超氧陰離子所致的脂質(zhì)過氧化,而前兩者在鄰位存在一個-OCH3,這可能是咖啡酸與前兩者效果不同的主要原因。從彗星尾距上來看,阿魏酸較香草酸的DNA保護效果稍微有差別,這是其在對位存在-CH=CHCOOH的結(jié)果,說明對位的-CH=CHCOOH較-COOH可以更有效的增強苯氧自由基的穩(wěn)定性。

綜上,上述5種酚類物質(zhì)均表現(xiàn)出了一定的保護DNA抗氧化活性,其中以咖啡酸保護DNA的作用最弱,可能與其鄰位的酚-OH以及產(chǎn)生較多的H2O2相關(guān),而且咖啡酸單獨與細胞作用時,可以產(chǎn)生DNA斷裂損傷,阿司匹林和水楊酸在高濃度組其尾距較低濃度組又有所回升,雖然其具體機制尚未完全明確,但也可能與產(chǎn)生H2O2相關(guān),而且信號傳導(dǎo)通路以及基因調(diào)控也可能參與到其中,阿魏酸和香草酸的效果較好,可能與其鄰位的-OCH3相關(guān)。

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