蛋白質(zhì)的分離純化是臨床助理醫(yī)師考試需要了解的內(nèi)容，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，以便廣大考生參考學(xué)習(xí)。

1.透析：利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開(kāi)的方法。

2.超濾法：應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過(guò)有一定截留分子量的超濾膜的方法。

3.丙酮沉淀：0-4℃低溫；丙酮的體積10倍于被沉淀蛋白質(zhì)；蛋白質(zhì)沉淀后應(yīng)迅速分離。

4.鹽析：硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽放入蛋白質(zhì)溶液中，破壞水化膜并中和表面電荷，導(dǎo)致蛋白質(zhì)膠體的穩(wěn)定因素去除而沉淀。

5.免疫沉淀法：利用特異抗體識(shí)別相應(yīng)的抗原蛋白，形成抗原抗體復(fù)合物，從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白的方法。

6.電泳：蛋白質(zhì)在高于或低于其等電點(diǎn)的溶液中，受到電場(chǎng)力的作用向正極或負(fù)極泳動(dòng)。

（1）SDS-PAGE電泳：加入負(fù)電荷較多的SDS（十二烷基磺酸鈉），導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子間的電荷差異消失，此時(shí)蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速率只和蛋白質(zhì)顆粒大小有關(guān)，用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定。

（2）等電聚焦電泳：在電場(chǎng)中形成一個(gè)連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度，電泳時(shí)被分離的蛋白質(zhì)泳動(dòng)至其等電點(diǎn)相等的pH值區(qū)域時(shí)，凈電荷為零不再受電場(chǎng)力移動(dòng)，該法用于根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異進(jìn)行分離。

（3）層析：待分離蛋白質(zhì)溶液（流動(dòng)相）經(jīng)過(guò)一個(gè)固態(tài)物質(zhì)（固定相）時(shí)，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)在兩相中反復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的。

7.陰離子交換層析：負(fù)電量小的蛋白質(zhì)首先被洗脫

8.凝膠過(guò)濾：分子量大的蛋白質(zhì)最先洗脫

9.超速離心：既可分離純化蛋白質(zhì)也可測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量；

對(duì)于球形蛋白質(zhì)而言，沉降系數(shù)S大體上和分子量成正比關(guān)系

S（未知）/S（標(biāo)準(zhǔn)）＝｛Mr（未知）/Mr（標(biāo)準(zhǔn)）｝^2/3