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多肽鏈氨基酸序列分析方法及關(guān)鍵試劑名稱是臨床助理醫(yī)師考試需要了解的內(nèi)容,醫(yī)學教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)知識點,以便廣大考生參考學習。
氨基酸序列分析
1.步驟一:分析已純化蛋白質(zhì)的氨基酸組成
2.步驟二:測定多肽鏈的氨基末端與羧基末端為何種氨基酸。以前用二硝基氟苯,現(xiàn)多用丹酰氯
3.步驟三:將肽鏈水解成片段(表1-2)。
表1-2 三種肽鏈水解方式的比較
|
胰蛋白酶 |
胰凝乳蛋白質(zhì)酶 |
溴化氫法 |
作用部位 |
賴氨酸或精氨酸羧基側(cè)的肽鍵 | 芳香族氨基羧基側(cè)的肽鍵 | 甲硫氨酸羧基側(cè)的肽鍵 |
4.步驟四:測定各肽段的氨基酸排列順序,采用Edman降解法,試劑為異硫氰酸苯酯
5.步驟五:統(tǒng)計學分析,組合排列對比,得到完整肽鏈氨基酸排列順序
通過核酸來推演蛋白質(zhì)中的氨基酸序列的步驟:
1.步驟一:分離編碼蛋白質(zhì)的基因
2.步驟二:測定DNA序列
3.步驟三:排列出mRNA序列
4.步驟四:按照三聯(lián)密碼的原則推演出氨基酸的序列
蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)測定
蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)含量測定:圓二色光譜法,測α-螺旋較多的蛋白質(zhì)時,結(jié)果較為準確。
蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)測定:X射線衍射法和磁共振技術(shù)。