血凝試驗（hemagglutinationtest）是紅細(xì)胞凝集試驗的簡稱。間接血凝試驗是以紅細(xì)胞作為載體的間接凝集試驗，在臨床檢驗中應(yīng)用廣泛，以下簡述其操作過程。

（一）載體

紅細(xì)胞是大小均一的載體顆粒，最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細(xì)胞及O型人紅細(xì)胞。新鮮紅細(xì)胞能吸附多糖類抗原，但吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力較差。致敏的新鮮紅細(xì)胞保存時間短，且易變脆、溶血和污染，只能使用2～3天。為此一般在致敏前先將紅細(xì)胞醛化，可長期保存而不溶血。常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。紅細(xì)胞經(jīng)醛化后體積略有增大，兩面突起呈圓盤狀。

醛化紅細(xì)胞具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力，血凝反應(yīng)的效果基本上與新鮮紅細(xì)胞相似。如用兩種不同醛類處理效果更佳。也可先用戊二醛，再用鞣酸處理。醛化紅細(xì)胞能耐60℃加熱，并可反復(fù)凍融不破碎，在4℃可保存3～6個月，在－20℃可保存一年以上。

（二）致敏

致敏用的抗原或抗體要求純度高，并保持良好的免疫活性。用蛋白質(zhì)致敏紅細(xì)胞的方法有直接法和間接法。直接法只須在低pH，低離子濃度下，用醛化紅細(xì)胞直接吸附即可。間接法則需用偶聯(lián)劑將蛋白質(zhì)結(jié)合到紅細(xì)胞上。常用偶聯(lián)劑為雙偶氮聯(lián)苯胺（bidiazotizedbenzidine，BDB）和氯化鉻。前者通過共價鍵，后者通過金屬陽離子靜電作用使蛋白質(zhì)與紅細(xì)胞表面結(jié)合而達(dá)到致敏的目的。

（三）血凝試驗

可在微量滴定板或試管中進(jìn)行，將標(biāo)本倍比稀釋，一般為1：64，同時設(shè)不含標(biāo)本的稀釋液對照孔。在含稀釋標(biāo)本1滴的板孔（或試管）中，加入0.5%致敏紅細(xì)胞懸液1滴，充分混勻，置室溫1～2小時，即可觀察結(jié)果。凡紅細(xì)胞沉積于孔底，集中呈一圓點的為不凝集（一）。如紅細(xì)胞凝集，則分布于孔底周圍。根據(jù)紅細(xì)胞凝集的程度判斷陽性反應(yīng)的強(qiáng)弱（圖13-4），以＋＋凝集的孔為滴度終點。

圖13-4血凝反應(yīng)強(qiáng)度示意圖

－：紅細(xì)胞沉積于孔底；＋：紅細(xì)胞沉積于孔底，周圍有散在少量凝集；

＋＋：紅細(xì)胞形成層凝集，面積較小，邊緣較松散；＋＋＋：紅細(xì)胞形

成片層凝集，面積略多于＋＋；＋＋＋＋：紅細(xì)胞形成片層凝集，均勻

布滿孔底，或邊緣皺縮如花邊狀