SPA酶聯(lián)免疫吸附試驗的注意事項：

1.目前使用的聚苯乙烯塑料板對抗體的吸附性能較好，因此對于抗原，特別是大分子（分子量＞100萬）的抗原應(yīng)該進行一些適當(dāng)?shù)奶幚?，如DNA，應(yīng)將其事先凍融，使其變成較小分子再包被，如脂蛋白則應(yīng)改變包被的溫度，可在37℃包被過夜醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

2.由于SPA－ELISA的敏感性極高，因此也很容易出現(xiàn)非特異性顯色，排除非特異性顯色的方法除了純化抗原抗體外，還應(yīng)該注意：

（1）抗原包被后，再以牛血清白蛋白包被一次或稀釋液中加入1%的牛血清白蛋白均可，以占據(jù)未包被的一些空隙。

（2）檢測血清抗體時，需事先檢測大標(biāo)本量的正常血清效價水平，在檢測待檢標(biāo)本時，減去正常的血清效價。

（3）ELISA法加入標(biāo)記物后往往37℃孵育2h，SPA同IgG的結(jié)合不是免疫反應(yīng)，而是一種化學(xué)反應(yīng)，一般認(rèn)為，這種結(jié)合可能在極短的時間內(nèi)發(fā)生，所以加PPA后，孵育時間可以縮短到0.5h.孵育過久，反而可因為SPA本身吸附到反應(yīng)板上，造成非特異性顯色。

3.疊氮鈉對SPA顯色影響較大，所以在SPA-ELISA過程中，不宜加疊氮鈉做防腐劑，在組織細(xì)胞培養(yǎng)固定，也不適宜用甲醛固定，而需采取甲醇或乙醇。