配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保存?zhèn)溆谩?
在免疫動物前,先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合,佐劑和抗原體積比一般為1:1,制備成 “油包水”乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復(fù)合物,注射入動物體內(nèi)時一定要保持乳化狀態(tài)??乖昧恳暱乖肿恿坎煌懊庖咴约懊庖邉游锊煌幸欢ú町?,無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和固定模式。一般是每兔(約2kg重)或每羊(約20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超過3mg.佐劑與抗原乳化可按如下方法進(jìn)行:
(1) 研磨法:先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內(nèi),待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液,邊滴邊按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,繼續(xù)研磨一段時間,使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理本法適于制備大量的佐劑抗原,缺點是研缽壁上粘附大量乳劑,抗原損失較大。
(2) 注射器混合法:將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內(nèi),兩注射器之間以一細(xì)膠管相連,注意排凈空氣,然后交替推動針管,直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點是容易做到無菌操作,抗原損失少,適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化完全,個別抗原,用塑料注射器根本推不動,而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴狀浮于水面,即乳化完全,為合格的油包水劑。
(3) 超聲:實驗室條件好點的,比如說有超聲破碎儀的,一定要控制超聲頻率和時間,超聲容易激發(fā)一些自由基,對抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。
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