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沙門(mén)氏菌的抗體檢驗(yàn)

2014-04-27 15:07 來(lái)源:
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  利用抗原-抗體反應(yīng)的顯著特異性,來(lái)進(jìn)行細(xì)菌的鑒別和血清學(xué)定型,已有半個(gè)多世紀(jì)的歷史。細(xì)菌菌體或鞭毛抗原的特異性抗體的存在,使得人們可以建立一些快速方法來(lái)檢測(cè)以食品為載體的病原。已經(jīng)建立的沙門(mén)氏菌免疫學(xué)檢測(cè)方法有許多種,大致可分為以酶標(biāo)抗體(ELISA),熒光抗體染色(免疫熒光法),同位素標(biāo)記抗體(放射免疫試驗(yàn))為基礎(chǔ)的方法及其它多種以抗體為基礎(chǔ),利用乳膠凝集、免疫傳感器、免疫擴(kuò)散及免疫色譜技術(shù)的方法。但常規(guī)中最廣泛采用的是以雙位點(diǎn)ELISA技術(shù)即夾心ELISA為基礎(chǔ)的方法。此法改進(jìn)后用有放射活性的同位素替代標(biāo)記抗體,概括地說(shuō),是指以固定在固體基質(zhì)上的“捕捉”抗體來(lái)捕捉目標(biāo)抗原,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的成分,加入第二種酶標(biāo)抗體,此者結(jié)合在捕捉到的抗原的不同位點(diǎn)上,第二次洗滌后加入酶作用基質(zhì),并令其與顏色成分反應(yīng),然后用分光光度法即很容易檢測(cè)到目標(biāo)抗原。采用微量滴定板作為固態(tài)基質(zhì)使反應(yīng)形式標(biāo)準(zhǔn)化,并促成其自動(dòng)化。

  應(yīng)用微量板ELISA法(Salmonelletest1)對(duì)進(jìn)出口動(dòng)物產(chǎn)品(魚(yú)粉、肉骨粉等)進(jìn)行沙門(mén)氏菌檢測(cè)醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)。該法采用預(yù)先包被了沙門(mén)氏菌(A-E群)單克隆抗體的微量板,加入經(jīng)增菌處理的樣品,反應(yīng)后再加入一定的指示劑,作用畢后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值來(lái)判定結(jié)果。食物樣品經(jīng)適當(dāng)?shù)脑鼍幚?,也可用此法進(jìn)行沙門(mén)氏菌檢測(cè)。ELISA法檢出沙門(mén)氏菌的極限范圍在105~106個(gè)細(xì)胞/ml,因此,要得出可靠的結(jié)果,食物樣品首先必需進(jìn)行預(yù)增菌、選擇性增菌,通常還要在含有D-甘露糖的肉湯(M肉湯)中進(jìn)行后增菌,以促進(jìn)鞭毛發(fā)育??偟膩?lái)說(shuō),標(biāo)準(zhǔn)的ELISA法樣品的制備,約需要經(jīng)過(guò)40~48h的孵育才能完成。黎兆滾等人的微量板ELISA法(Salmonellatest1)樣品制備過(guò)程分三步,共耗時(shí)24h:①選用營(yíng)養(yǎng)肉湯進(jìn)行預(yù)增菌(6h),使“致傷”、冷凍的沙門(mén)氏菌復(fù)蘇。②使用選擇性培養(yǎng)基RV進(jìn)行增菌(14h),使沙門(mén)氏菌大量繁殖,同時(shí)抑制其它雜菌生長(zhǎng)。③使用營(yíng)養(yǎng)肉湯(蛋白胨水)進(jìn)行后增菌(4h),使沙門(mén)氏菌的數(shù)量大大增加。比上述標(biāo)準(zhǔn)的ELISA法樣品制備過(guò)程縮短了一半的時(shí)間。ELISA方法本身,則僅需要大約2h而已(其中30min是操作時(shí)間,90min是孵育時(shí)間)。相比之下,黎兆滾等人的方法可在27h內(nèi)完成,比上述方法縮短了一半的時(shí)間。

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