摘 要:
目的 采用一種新的銪螯合物BHHCT,制備高靈敏度熒光標記物,建立B型鈉尿肽(BNP)固相時間分辨熒光免疫分析法(TrFIA).
方法 使用2株匹配的單克隆抗體,其中1株可以識別BNP分子C-端區(qū),另1株生物素化單抗能識別分子內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu),分別作為捕獲抗體和檢測抗體,并利用制備的SA-BHHCT-Eu3+作為示蹤物,建立雙抗體夾心法,檢測正常對照組和心功能Ⅰ~Ⅳ級心力衰竭患者組血液BNP含量。
結(jié)果 本法測定BNP的靈敏度為12 pg/ml,批內(nèi)和批間CV分別為3.9%和5.2%,平均回收率為97.3%,線性范圍為20~4 000 pg/ml。對照組(n=110)、心功能Ⅰ級(n=31)、Ⅱ級(n=30)、Ⅲ~Ⅳ級(n=25)各組血漿BNP濃度分別為(6937)、(8446)、(346134)和(932326)pg/ml;心衰各組BNP水平顯著高于對照組(P<0.05或P<0.001)。以BNP 100pg/ml為cut off值,診斷心力衰竭(HF)的特異性為82.4%,敏感性為91.6%。
結(jié)論 應(yīng)用銪螯合物BHHCT建立的固相TrFIA法測定BNP,是一個很好的診斷心衰和監(jiān)測其嚴重程度的實驗診斷指標。