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狂犬病毒核蛋白單抗和熒光抗體中和試驗(yàn)的建立與應(yīng)用

2009-03-17 14:10 來(lái)源:
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  摘 要:目的建立狂犬病毒血清中和抗體效價(jià)的快速檢測(cè)方法,以實(shí)現(xiàn)狂犬疫苗免疫效果的定量評(píng)價(jià),指導(dǎo)高危人群及動(dòng)物種群的免疫預(yù)防。

  方法 采用常規(guī)方法建立雜交瘤細(xì)胞株并制備抗狂犬病毒核蛋白單抗,以親和層析法進(jìn)行純化,異硫氰酸熒光黃標(biāo)記制備熒光抗體;以BHK-21細(xì)胞系培養(yǎng)狂犬病毒細(xì)胞適應(yīng)株CVS-11,以染毒細(xì)胞測(cè)定熒光抗體的工作濃度后,通過(guò)熒光抗體染色法測(cè)定CVS-11細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID50);利用狂犬病毒滅活疫苗免疫犬制備抗狂犬病毒血清,并以國(guó)際獸疫局標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行標(biāo)定;參考世界衛(wèi)生組織及國(guó)際獸疫局推薦方法,確定中和試驗(yàn)程序,對(duì)51份樣品血清進(jìn)行測(cè)定,并與國(guó)際狂犬病參考實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較,評(píng)價(jià)其精確及可靠程度。以Kaber法公式和Microsoft Excel(R)軟件為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)被測(cè)樣品中和效價(jià)計(jì)算方法。

  結(jié)果 制備的抗狂犬病毒核蛋白單抗的亞型為IgG2a;純化、標(biāo)記后的熒光抗體工作濃度為1:400;CVS-11株的使用量為每孔100 TCID50;本研究建立的檢測(cè)程序?qū)?1份人及犬血清測(cè)得的中和效價(jià)結(jié)果與國(guó)際參考實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果一致;自行設(shè)計(jì)的計(jì)算方法操作簡(jiǎn)便,計(jì)算快捷。

  結(jié)論 成功建立了與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)?shù)目袢《局泻涂贵w效價(jià)測(cè)定和計(jì)算方法。

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