摘 要:目的研制靈敏、特異和穩(wěn)定的可溶性人細(xì)胞分化抗原28(sCD28)酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒,并探討其臨床應(yīng)用意義。
方法 取識(shí)別不同抗原位點(diǎn)的單抗8G8和2D5分別作為包被單抗和檢測(cè)單抗,建立雙單抗夾心sCD28酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(sCD28-ELISA),并繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。同時(shí),測(cè)定36名健康人、23例系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、38例類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和62例Grave病患者血清中sCD28含量。
結(jié)果 研制的sCD28試劑盒最低檢測(cè)下限為0.3 ng/ml,具有良好線性關(guān)系的檢測(cè)范圍是0.5~16.0 ng/ml;8G8單抗包被測(cè)定板后置4℃冰箱保存180 d,加入可溶性CD28-Ig重組蛋白的回收率在93%~109%之間。SLE、RA和Grave病患者血清中sCD28含量分別為0.9~7.3 ng/ml、0.3~6.8 ng/ml、0.2~3.5 ng/ml,明顯高于健康人(0~1.1 ng/ml,P<0.01)。
結(jié)論 自制的sCD28試劑盒,能準(zhǔn)確測(cè)定樣本中sCD28含量,可為sCD28分子基礎(chǔ)研究和臨床疾病輔助診斷、療效評(píng)估及預(yù)后判斷提供有價(jià)值的生物學(xué)參數(shù),具有良好應(yīng)用前景。