摘 要:目的探討RhoA/ROK信號通路對人外周血單核細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等細(xì)胞因子的調(diào)控作用。
方法 用Percoll非連續(xù)性密度梯度離心法分離單核細(xì)胞,并用LPS誘導(dǎo)人外周血單核細(xì)胞活化;Pull down方法檢測用RhoA活性,ROK活性用其底物MBS的磷酸化來表示,總RhoA、ROK及磷酸化MBS蛋白表達(dá)用免疫印跡法測定,用ELISA法檢測細(xì)胞因子水平。
結(jié)果 LPS可誘導(dǎo)單核細(xì)胞RhoA快速活化,并呈時間依賴性,Rho特異性抑制劑C3轉(zhuǎn)化酶能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的人外周血單核細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等細(xì)胞因子;LPS亦可誘導(dǎo)單核細(xì)胞ROK活化,ROK特異性抑制劑Y27632可顯著降低LPS刺激的人外周血單核細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等細(xì)胞因子。
結(jié)論 LPS可活化人外周單核細(xì)胞RhoA/ROK信號通路,選擇性抑制RhoA和ROK活化能抑制單核細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子,提示RhoA/ROK信號通路可能在調(diào)控單核細(xì)胞分泌細(xì)胞因子中發(fā)揮重要作用。