石蠟切片的優(yōu)點是組織結構保存良好,在病理和回顧性研究中有較大的實用價值,能切連續(xù)薄片,組織結構清晰,抗原定位準確。用于免疫組化技術的石蠟切片制備與常規(guī)制片略有不同:①脫水、透明等過程應在4℃下進行,以盡量減少組織抗原的損失。②組織塊大小應限于2cm×1.5cm×0.2cm,使組織充分脫水、透明、浸蠟。③浸蠟、包埋過程中,石蠟應保持在60℃以下,以溶點低的軟蠟最好(即低溫石蠟包埋)。
石蠟切片為常規(guī)制片技術,切片機多為輪轉式,切片厚度2~7μm,應用范圍廣,不影響抗體的穿透性,染色均勻一致。由于甲醛固定、有機熔劑和包埋劑對組抗原有一定的損害及遮蔽,使抗原特征發(fā)生改變。有人報告經蛋白酶消化,可以改善光鏡免疫組化染色強度,常用的有胰蛋白酶、鏈霉蛋白酶及胃蛋白酶等消化法。石蠟切片醫(yī)學教育`網搜集整理應入37℃恒溫箱過夜,這樣烤片可減少染色中脫片現(xiàn)象,切片如需長期貯存,可存放于4℃冰箱內備用。
石蠟切片優(yōu)點較多,但在制片過程中要經過酒精、二甲苯等有機溶劑處理,組織內抗原活性失去較多,有人采用冷凍干燥包埋法,可以保存組織內可溶性物質,防止蛋白變性和酶的失活,從而減少了抗原的丟失。該法是將新鮮組織低溫速凍,利用冷凍干燥機在真空、低溫條件下排除組織內水分,然后用甲醛蒸氣固定干燥的組織,最后將組織浸蠟、包埋、切片。此法可用于免疫熒光標記、免疫酶標記及放射自顯影。