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ELISA測定——溫育

2010-03-19 20:50 來源:
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  溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。

  溫育這一步是臨床 ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃ 30分鐘~1小時,進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1~2小時才能有較完全的結(jié)合,低于1小時,可能會影響測定下限。因此醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理,關(guān)于溫育,在實(shí)際測定操作中一定要注意以下幾點(diǎn):

  要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間。一般來說,加完樣本和/或反應(yīng)試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時,孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需要一定的時間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時間可能還比較長,而在臨床實(shí)驗(yàn)室中,很少有人注意這個問題,通常是將微孔板一放入溫箱即開始計時,這樣就很容易造成實(shí)際測定中溫育時間不夠,弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題,就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時間,在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中,測定由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時,總是測不出來,不知原因?yàn)楹??這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),此時微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時間不夠,以致弱陽性樣本測定為陰性。因此,為保證37℃下足夠的溫育時間,臨床實(shí)驗(yàn)室可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃,從而適當(dāng)延長板條在溫箱中的放置時間。具體的做法是,用一小溫度計放置板孔反應(yīng)溶液中測量觀察即可。

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