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膜載體的酶免疫測定的斑點(diǎn)-ELISA

2011-07-14 16:07 來源:
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  膜載體的酶免疫測定的斑點(diǎn)-ELISA是檢驗(yàn)技師考試的內(nèi)容,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理相關(guān)內(nèi)容供大家參考。

  斑點(diǎn)-ELISA(dot-ELISA)的特點(diǎn)時(shí):①以吸附蛋白質(zhì)能力很強(qiáng)的硝酸纖維素膜為固相載體;②底物經(jīng)酶反應(yīng)后形成有色沉淀,使固相膜染色。在實(shí)驗(yàn)室中斑點(diǎn)-ELISA可按下法進(jìn)行。在硝酸纖維膜上用鉛筆劃成4mm×4mm的小格,在每格中央點(diǎn)加抗原1~2μl,成為一個(gè)小點(diǎn)。干燥后將每格剪下分別放入ELISA板孔中,按ELISA方法操作,最后加入能形成不溶性有色沉淀的底物,如在膜上出現(xiàn)染色斑點(diǎn),即為陽性反應(yīng)(圖4-10-2)。因硝酸纖維素膜吸附性能強(qiáng),一般在包被后須再進(jìn)行封閉。如將硝酸纖維素膜裁剪成膜條,并在同一張膜條上點(diǎn)有多種抗原,將整個(gè)膜條與同一份血清反應(yīng),則可同時(shí)獲得對(duì)多種疾病的診斷結(jié)果。斑點(diǎn)-ELISA的缺點(diǎn)是操作麻煩,特別是洗滌的操作很不方便。

  應(yīng)用斑點(diǎn)-ELISA的原理,通過特殊工藝已制備出各種試劑,供臨床檢驗(yàn)用。一般分三種類型:①將試劑膜粘貼在塑料條片,便于洗滌和觀察。②將試劑膜封在小盒內(nèi),膜下墊吸水劑,洗滌液通過膜吸入盒內(nèi)。此即斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)。③將試劑膜固定在小杠框格中放入特殊的自動(dòng)分析儀中檢測。應(yīng)用這一系統(tǒng)可做各種蛋白質(zhì)、激素、藥物和抗生素的定量測定。

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