免疫熒光組織化學間接法是檢驗技師考試的內容,醫(yī)學教育網搜集整理相關內容供大家參考。
1.檢查抗體法(夾心法):此法是先用特異性抗原與細胞或組織內抗體反應,再用此抗原的特異性熒光抗體與結合在細胞內抗體上的抗原相結合,抗原夾在細胞抗體與熒光抗體之間,故稱夾心法。
2.檢查抗體法:用已知抗原細胞或組織標本的切片,加上待檢血清,如果其中含有切片中某種抗原的抗體,抗體便沉淀結合在抗原上,再用間接熒光抗體(抗種屬特異性IgG熒光抗體)與結合在抗原上的抗體反應(如檢測人血清中的抗體必需用抗人IgG熒光抗體等),在熒光顯微鏡下可見抗原抗體反應部位呈現(xiàn)明亮的特異性熒光。此法是檢驗血清中自身抗體和多種病原體抗體的重要手段。
3.檢查抗原法雙薄片:此法是直接法的重要改進,先用特異性(對細胞或組織內抗原)抗體(或稱第一抗體)與細胞標本反應,隨后用緩沖鹽水洗去未與抗原結合的抗體,再用間接熒光抗體(也稱第二抗體,種特異性)與結合在抗原上的抗體(是第二抗體的抗原)結合,形成抗原-抗體-熒光抗體的復合物。由于結合在抗原抗體復合物上的熒光抗體顯著多于直接法,從而提高了敏感性。如細胞抗原上每個分子結合3~5個分子抗體,當此抗體作為抗原時又可結合3~5分子的熒光抗體,所以和直接法相比熒光亮度可增強3至4倍。此法除靈敏性高外,它只需要制備一種種屬間接熒光抗體,可以適用于多種第一抗體的標記顯示。這是現(xiàn)在最廣泛應用的技術。