小鼠的單克隆抗體蛋白應(yīng)用于人體后,作為抗原能引起人的免疫應(yīng)答,大大降低其生物活性,并可能導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)。因此人源單克隆抗體在臨床治療上有廣泛應(yīng)用前景,引起人們的普遍興趣。但是人單克隆抗體制備存在許多技術(shù)上和倫理上的障礙,如人雜交瘤細(xì)胞系不穩(wěn)定,有些抗原不能對(duì)人進(jìn)行人工免疫,人B細(xì)胞只能從外周血中分離而無(wú)法從脾臟取得等。盡管如此,一些人源單克隆抗體已經(jīng)獲得,技術(shù)上也在逐步完善起來(lái)。
人的瘤細(xì)胞株U—266常用來(lái)與人外周血B細(xì)胞融合以獲得人源單克隆抗體。醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理另一些淋巴母細(xì)胞抹(LCL)則來(lái)源于EB病毒轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞,如GMl500,W1—L2和ARH77等也用于雜交瘤細(xì)胞的制備。這些細(xì)胞系表現(xiàn)ED病毒核抗原(EBNA)陽(yáng)性,且形成的雜交瘤細(xì)胞抗體的分泌水平不高。
獲得人單克隆抗體的另一方法是用EBV直接轉(zhuǎn)化某些抗體分泌細(xì)胞,使之成為“不死”的細(xì)胞在體外培養(yǎng)。EBV感染人B細(xì)胞后,病毒基因插入人B細(xì)胞基因組中,有1%的細(xì)胞轉(zhuǎn)化為“不死”的細(xì)胞。B細(xì)胞轉(zhuǎn)化可通過(guò)“病毒驅(qū)動(dòng)”和“細(xì)胞驅(qū)動(dòng)”兩種方法獲得。前者是將B細(xì)胞與分泌EBV的B95—8細(xì)胞系一同培養(yǎng),后者則是與EBNA陽(yáng)性的LCL細(xì)胞一同培養(yǎng)。“細(xì)胞驅(qū)動(dòng)”轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞比較穩(wěn)定,抗體分泌能力也較強(qiáng)。
人淋巴母細(xì)胞系和人雜交瘤細(xì)胞較難獲得,人單克隆抗體也可以通過(guò)異源雜文的辦法制備,即將EBV轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合,將獲得的異源雜交瘤細(xì)胞再與免疫后的B細(xì)胞融合,得到人單克隆抗體分泌細(xì)胞,不產(chǎn)生自身免疫球蛋白,EBVA也是陰性。
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